隱孢子蟲感染對奶牛生理生化指標(biāo)及生產(chǎn)性能影響的研究.pdf

1、隱孢子蟲(Cryptosporidium)是人和動物腹瀉的重要病原之一，也是人類艾滋病患者的主要致死因素之一。美國疾病預(yù)防控制中心將其列為B類病原。隱孢子蟲病(Cryptosporidisis)是一種由隱孢子蟲引起的呈世界性分布的人畜共患寄生蟲病。2003年該病被列為我國重點(diǎn)防范的兩種重要寄生蟲病之一。近20年來，隱孢子蟲病研究在病原學(xué)、形態(tài)學(xué)、流行病學(xué)、病原分子生物學(xué)、診斷及綜合防治技術(shù)等方面取得許多重要成果；但是在治療方面，尚未見到

2、公認(rèn)有效的療法或藥物報(bào)道，主要原因是迄今沒有揭示其完整的致病機(jī)理。 本課題旨在通過對安徽省某奶牛場奶牛隱孢子蟲檢測獲取隱孢子蟲感染強(qiáng)陽性奶牛，然后對其進(jìn)行某些指標(biāo)觀察、檢測及分析；通過這些指標(biāo)的統(tǒng)計(jì)、分析，研究隱孢子蟲感染奶牛后，對奶牛的生理生化指標(biāo)及生產(chǎn)性能的影響。 首先從安徽省某奶牛場采集381份奶牛糞樣，用金胺酚-改良抗酸染色及飽和白糖漂浮后，通過顯微鏡觀察，根據(jù)其形態(tài)、結(jié)構(gòu)、大小等特征，鑒定蟲種為鼠隱孢子蟲(Cr

3、yptosporidiummuris)。 對不同年齡段奶牛隱孢子蟲感染情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)、分析后發(fā)現(xiàn)：各個年齡段奶牛均可感染隱孢子蟲，但不同年齡段奶牛隱孢子蟲感染情況不同；犢牛感染率顯著高于其他兩個年齡段的奶牛，而青年牛和成年牛間的感染率差異不顯著。同時發(fā)現(xiàn)各年齡段奶牛隱孢子蟲感染強(qiáng)度高低不均。 其次采用蔗糖密度梯度離心法對分離的隱孢子蟲卵囊進(jìn)行純化。取純化過的卵囊沉淀，先經(jīng)高速組織勻漿機(jī)勻漿，后于超聲波細(xì)胞裂解儀上裂解，提取

4、模板DNA。根據(jù)隱孢子蟲18srDNA序列，設(shè)計(jì)并合成出隱孢子蟲特異性引物，擴(kuò)增出540bp的片段。初始PCR產(chǎn)物進(jìn)一步作套式PCR，擴(kuò)增出一條250bp特異性的片段。 隨機(jī)直腸采取成年奶牛糞樣64份，編號，分別用上述4種方法檢測。在64份奶牛糞樣中，分別采用金胺酚-改良抗酸染色法及飽和白糖溶液漂浮法判為陽性的奶牛糞樣有11份及12份，這些陽性糞樣經(jīng)PCR和套式PCR檢測均呈陽性；11342號糞樣采用金胺酚-改良抗酸染色法判為陽

5、性，而經(jīng)飽和白糖溶液漂浮法判為陰性，應(yīng)用PCR方法及套式PCR檢測均呈陽性。經(jīng)t檢驗(yàn)，PCR和套式PCR方法檢出率均明顯高于病原學(xué)方法。 再次臨床駐點(diǎn)觀察、檢測14頭隱孢子蟲感染強(qiáng)陽性奶牛及14頭健康、隱孢子蟲感染陰性奶牛的體溫、脈搏次數(shù)、呼吸次數(shù)、產(chǎn)奶量、乳房炎等指標(biāo)并詳細(xì)記錄，分析其與隱孢子蟲感染的關(guān)系。結(jié)果顯示，隱孢子蟲感染后奶牛體溫、脈搏次數(shù)、呼吸次數(shù)未見顯著性變化，說明這些臨床指標(biāo)不適宜作為隱孢子蟲病診斷的主要指標(biāo)。但

6、是與健康、隱孢子蟲感染陰性組奶牛相比，隱孢子蟲感染強(qiáng)陽性組奶牛的產(chǎn)奶量下降極為顯著，乳房炎感染率也顯著升高。 最后以10頭隱孢子蟲感染強(qiáng)陽性奶牛為試驗(yàn)組，另取10頭隱孢子蟲感染陰性、健康奶牛為對照組。采取血液及分離血清后，分別對隱孢子蟲感染強(qiáng)陽性組奶牛和陰性、健康組奶牛進(jìn)行AST、ALT、ALP、γ-GT、TP、A、A/G、BUN、血糖、肌酐、NO、SOD等生化指標(biāo)的檢測。發(fā)現(xiàn)BUN、肌酐、AST、ALT及SOD活性均沒有發(fā)生顯