頸椎間盤在頸性眩暈發(fā)病中作用的實驗研究.pdf

1、目的：1、了解正常大鼠頸椎椎間盤神經(jīng)分布情況（分布部位、長入深度）及種類（交感神經(jīng)、感覺神經(jīng)）；2、觀察大鼠頸椎間盤內(nèi)壓力變化時其椎-基底動脈血供區(qū)（枕后部-枕外隆突旁）血流灌注的變化；3、探討頸椎間盤因素（神經(jīng)因素、間盤壓力因素）在頸性眩暈發(fā)病中可能的作用機(jī)制。
　　 方法：本實驗選取40只成年Wistar大鼠作為實驗對象，體重250g～300g，雌雄不限。1、應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法對頸椎間盤內(nèi)交感神經(jīng)和感覺神經(jīng)兩種肽能神經(jīng)纖

2、維進(jìn)行定性、定位觀察，顯微鏡下觀察其分布特點；2、應(yīng)用激光多普勒測定頸椎間盤內(nèi)壓力變化時椎一基底動脈血流變化情況。3、應(yīng)用SAS6.12統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。率的比較應(yīng)用四格表資料的Fisher確切概率法；計量資料采用配對t檢驗。實驗共分為實驗一和實驗二兩部分。
　　 實驗一：隨機(jī)從40只實驗用Wistar大鼠中選擇8只，每只大鼠切取C5/6，C6/7頸椎間盤單位作為實驗標(biāo)本，標(biāo)本取材后固定、脫鈣、石蠟包埋，然后連續(xù)石蠟切片，

3、切片厚度為5μm。每一頸椎間盤單位（包括椎間盤及上下終板軟骨）連續(xù)切片去掉終板軟骨后切取切片行HE染色觀察。選擇HE染色椎間盤大體形態(tài)完整的4張切片，其中2張進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色分別觀察交感神經(jīng)纖維和感覺神經(jīng)纖維的分布情況，另外2張用做免疫組化空白對照。取自體空腸組織切片同時染色作為陽性對照。
　　 實驗二：隨機(jī)從40只實驗用Wistar大鼠中選擇16只平均分為兩組：C5/6刺激組和C6/7刺激組。每組頸椎間盤內(nèi)給予壓力刺激，用

4、激光多普勒血流儀測定刺激前后椎基底動脈血供區(qū)（枕后部-枕外隆突旁）血流量變化。
　　 結(jié)果：
　　 1、實驗一
　　 1.1 HE染色：光鏡下見椎間盤外形近左右為長軸的橢圓形，前緣較凸，后緣較凹。間盤由髓核和纖維環(huán)構(gòu)成。髓核位于中央偏后方，為柔軟而富有彈性的膠樣物質(zhì)，周圍為板層狀的纖維環(huán)，纖維環(huán)成同心圓樣圍繞在髓核的周圍，纖維環(huán)排列整齊。纖維環(huán)的前方和后方部分在外形上是不同的。纖維環(huán)的前面部分在中線上最厚，隨著向

5、椎間盤的兩側(cè)，厚度逐漸變薄。纖維環(huán)前部呈新月形，而后方由一薄層的膠原纖維構(gòu)成。
　　 1.2免疫組化對照實驗：空白對照實驗結(jié)果均呈陰性；陽性對照實驗結(jié)果顯示小腸壁內(nèi)含豐富的SP、NPY免疫反應(yīng)陽性的神經(jīng)纖維。
　　 1.3免疫組織化學(xué)表達(dá)結(jié)果：免疫組織化學(xué)SP方法特異性好，背景不著色或淺黃色。實驗組SP和NPY免疫反應(yīng)陽性神經(jīng)纖維在C5/6，C6/7椎間盤纖維環(huán)的前緣和后緣均有分布。NPY神經(jīng)纖維在C5/6椎間盤前緣和后

6、緣陽性表達(dá)率分別為63％（5/8）和50％（4/8）；SP神經(jīng)纖維在C5/6椎間盤前緣和后緣陽性表達(dá)率分別為75％（6/8）和50％（4/8）；C6/7椎間盤前緣和后緣NPY神經(jīng)纖維陽性表達(dá)率分別為50％（4/8）和63％（5/8）；C6/7椎間盤前緣和后緣SP神經(jīng)纖維陽性表達(dá)率分別為63％（5/8）和75％（6/8）。實驗組兩種神經(jīng)纖維免疫組化陽性表達(dá)率與空白對照組（陽性表達(dá)率為0）比較均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。同一椎間盤節(jié)段前

7、緣和后緣神經(jīng)分布陽性表達(dá)率情況比較無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。免疫反應(yīng)陽性纖維呈淺棕色至深棕色不等，顯示點線狀或膨大的顆粒狀，分布在纖維環(huán)的外1/3近邊緣處。
　　 2、實驗二
　　 C5/6頸椎間盤后方壓力刺激前后，椎-基底動脈血供區(qū)（枕后部-枕外隆突旁）血流量分別為111±5（PU）和109±10（PU），血流量變化刺激前后比較無統(tǒng)計學(xué)意義（p>0.05）。C6/7頸椎間盤后方壓力刺激前后，椎-基底動脈血供區(qū)（枕后

8、部-枕外隆突旁）血流量分別為111±15（PU）和104±10（PU），血流量變化刺激前后比較無統(tǒng)計學(xué)意義（p>0.05）。
　　 結(jié)論：分布于頸椎間盤的交感神經(jīng)和感覺神經(jīng)纖維是感受椎間盤病變刺激的生理基礎(chǔ)，該兩種肽能神經(jīng)受到刺激可能與交感神經(jīng)激惹一系列癥狀有關(guān)，該兩種肽能神經(jīng)可能在頸性眩暈的發(fā)病中起著重要作用。間盤內(nèi)壓力增高是退變椎間盤內(nèi)常見的一種病理刺激，可能會通過刺激間盤內(nèi)神經(jīng)纖維引起交感神經(jīng)受到激惹。然而本實驗結(jié)果顯示正