海水鈍頂螺旋藻多糖對(duì)免疫低下小鼠及慢性乙型肝炎患者免疫功能的影響.pdf

1、[目的]: 從海南生產(chǎn)的海水鈍頂螺旋藻中提取多糖，并研究其對(duì)環(huán)磷酰胺所致免疫低下小鼠免疫功能的影響，及其對(duì)慢性乙型肝炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞免疫功能的影響，探討其在生物醫(yī)藥領(lǐng)域中應(yīng)用可能性，為進(jìn)一步深入研究鈍頂螺旋藻多糖的功能和應(yīng)用提供理論及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 [方法]： 采用改良的三氯乙酸法提取海水鈍頂螺旋藻多糖。用紅外光譜法測(cè)定鈍頂螺旋藻多糖分子結(jié)構(gòu)。用環(huán)磷酰胺腹腔注射法建立免疫功能低下小鼠的模型，再分別給予2mg/m

2、l、4mg/ml和8mg/ml鈍頂螺旋藻多糖，運(yùn)用MTT法和比色法檢測(cè)各組小鼠脾細(xì)胞、胸腺細(xì)胞增殖能力和小鼠巨噬細(xì)胞吞噬功能、分泌IL-1功能。用流式細(xì)胞術(shù)和 ELISA 法分別檢測(cè)細(xì)胞周期變化和小鼠脾細(xì)胞培養(yǎng)上清 IFN-γ濃度變化；采用Greiss法檢測(cè)各組小鼠巨噬細(xì)胞分泌NO功能。運(yùn)用MTT法和流式細(xì)胞術(shù)分別測(cè)定鈍頂螺旋藻多糖對(duì)慢性乙型肝炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞增殖能力和細(xì)胞周期的影響，采用ELISA 法檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞培養(yǎng)上清

3、細(xì)胞因子IFN-γ、IL-2和IL-4濃度，同時(shí)用RT-PCR法檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞IFN-γmRNA的表達(dá)。 [結(jié)果]： 1．得到灰白色粉末狀海水鈍頂螺旋藻多糖，多糖含量92.62％。紅外光譜顯示鈍頂螺旋藻多糖的糖苷鍵為僅α-構(gòu)型，具有吡喃型糖環(huán)。 2．12.5μg/ml～1000μg/ml鈍頂螺旋藻多糖能夠增強(qiáng)ConA或LPS誘導(dǎo)的小鼠脾細(xì)胞增殖和巨噬細(xì)胞吞噬功能，且呈劑量-效應(yīng)關(guān)系。 3．模型對(duì)照組

4、小鼠脾細(xì)胞和胸腺細(xì)胞增殖明顯低于正常對(duì)照組，脾細(xì)胞和胸腺細(xì)胞細(xì)胞周期與正常對(duì)照組相比發(fā)生G0/G1期阻滯，2mg/ml、4mg/ml 和8mg/ml鈍頂螺旋藻多糖能顯著提高環(huán)磷酰胺所致免疫低下小鼠脾細(xì)胞和胸腺細(xì)胞的增殖能力，使脾細(xì)胞和胸腺細(xì)胞細(xì)胞周期發(fā)生S期和G2/M 期轉(zhuǎn)換。 4．模型對(duì)照組小鼠巨噬細(xì)胞吞噬功能、分泌IL-1和NO濃度明顯低于正常對(duì)照組，2mg/m、4mg/m和8mg/m鈍頂螺旋藻多糖能顯著提高環(huán)磷酰胺所致免疫

5、低下小鼠巨噬細(xì)胞的免疫功能。 5．模型對(duì)照組小鼠脾細(xì)胞分泌IFN-γ濃度明顯低于正常對(duì)照組，2mg/ml、4mg/ml和8mg/ml鈍頂螺旋藻多糖能顯著提高環(huán)磷酰胺所致免疫低下小鼠脾細(xì)胞分泌IFN-γ。 6．12.5μg/ml～1000μg/ml鈍項(xiàng)螺旋藻多糖能顯著增強(qiáng)慢性乙型肝炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞的增殖能力，并使其細(xì)胞周期發(fā)生S期和G2/M期轉(zhuǎn)換。 7．鈍頂螺旋藻多糖能顯著增強(qiáng)慢性乙型肝炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞

6、分泌細(xì)胞因子IFN-γ和IL-2，且能顯著降低慢性乙型肝炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞分泌細(xì)胞因子IL-4。 8．100μg/ml、200μg/ml和400μg/ml鈍頂螺旋藻多糖能顯著上調(diào)慢性乙型肝炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞IFN-γ mRNA的表達(dá)。 [結(jié)論]： 從海水鈍頂螺旋藻中成功分離得到具有免疫活性的鈍頂螺旋藻多糖，該多糖能夠提高環(huán)磷酰胺所致免疫低下小鼠的免疫功能，對(duì)慢性乙型肝炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞的免疫功能具有調(diào)