2004年—2008年成都地區(qū)奈瑟氏淋球菌耐藥及質(zhì)粒譜的分析研究.pdf

1、目的：淋病是常見的性傳播疾?。⊿TD）之一，因普遍存在耐藥，傳統(tǒng)的抗生素青霉素、四環(huán)素早已不再應用于淋病治療，有資料顯示，高水平質(zhì)粒介導的TRNG（耐四環(huán)素淋球菌）和染色體介導的TRNG的比例在上升，而產(chǎn)青霉素酶淋球菌（PPNG）有下降趨勢，這可能與近年來青霉素不再作為治療淋病的一線藥物有關。因此，對淋球菌耐藥菌株的研究依然是淋球菌耐藥流行病學監(jiān)測的重要指標之一。淋病奈瑟氏菌（NG）產(chǎn)生耐藥與染色體介導、質(zhì)粒介導、多重可傳遞耐藥系統(tǒng)即m

2、tr外排系統(tǒng)、脂肪酸耐藥系統(tǒng)即far外排系統(tǒng)和norm外排系統(tǒng)有關。研究發(fā)現(xiàn)，質(zhì)粒介導的耐藥占所有耐藥菌株的91%左右，可通過電泳使不同分子量大小的質(zhì)粒因遷移率的不同而顯示出不同的條帶。用分子生物學技術進行質(zhì)粒譜分析可以更準確的監(jiān)測耐藥的變化。本文通過2004年-2008年成都地區(qū)淋病奈瑟氏菌耐藥狀況的研究，分析了近五年該地區(qū)淋病奈瑟菌耐藥的現(xiàn)狀及其耐藥質(zhì)粒譜的變化，為淋病耐藥監(jiān)測提供了更翔實的依據(jù)，同時為淋病的藥物治療提供了重要參考。

3、 方法：1．收集2004年-2008年共150株奈瑟氏淋球菌，并經(jīng)細菌形態(tài)學、氧化酶和糖發(fā)酵實驗進一步確證；2．將收集的淋球菌制成108CFU/ml菌懸液，加入裂解液，100℃加熱15分鐘，10000r/min離心15分鐘，取上清液2ul作為PCR擴增模板，在微量離心管中依次加入10×buffer（含Mgcl21．5mmol/l）3ul；10pmol/l特異性正反引物各1ul；10mmol/l dNTP0．25 ul；Taq D

4、NA聚合酶1．5U；模板DNA2ul；加入雙蒸水至30ul后加入液體石蠟10 ul后按照反應條件進行PCR擴增，之后在微量離心管中加入0．25%溴酚藍5ul，混勻靜置后取6ul加入2%瓊脂糖凝膠水平式電泳槽加樣孔中，并在首尾孔加6 ul DNAmarker以作參照，電泳儀電壓調(diào)節(jié)至75V，電泳2小時后關閉電源，取出平板于紫外儀下觀察結(jié)果并照相，畫圖記錄。對所得數(shù)據(jù)進行整理，分別將2004-2008年間耐青霉素、耐四環(huán)素和耐環(huán)丙沙星的淋球

5、菌菌株的平均耐藥率與2000-2004年的平均耐藥率進行比較，得出三種藥物的耐藥率變化。將2004-2008年分離的NG菌株的耐藥質(zhì)粒大小及型別進行分析得出2004-2008年NG質(zhì)粒譜。 結(jié)果：1．2004-2008年間PPNG檢出情況：2004年-2008年從每年30株NG菌株中檢出的耐青霉素菌株分別為：27、3、0、6、18株；每年PPNG耐藥率分別為：90．00%、10．00%、0．00%、20．00%、60．00%；P

6、PNG在2004-2008年間的耐藥平均率為36．00%。2．PPNG的耐藥類型：2004年和2008年PPNG以染色體介導為主，主要為340bp大小的penA基因（耐青霉素結(jié)合蛋白2編碼序列）；2005年和2007年以質(zhì)粒介導為主，主要為產(chǎn)物長度為535bp的TEM基因。2004-2008年間PPNG耐藥質(zhì)粒均為亞洲型質(zhì)粒。3．2004-2008年間TRNG檢出情況：2004年-2008年從每年30株NG菌株中檢出的TRNG菌株分別為

7、：12、20、13、23、15株。每年TRNG耐藥率分別為：40．00%、66．67%、43．33%、76．66%、50．00%；TRNG在2004-2008年間的耐藥平均率為55．33%。4．TRNG的耐藥類型：以質(zhì)粒介導為主，為501bp大小的tetM基因（耐四環(huán)素核糖體保護蛋白編碼序列）。5．2004-2008年間耐環(huán)丙沙星菌株（CPNG）檢出情況：2004年-2008年從每年30株NG菌株中檢出的CPNG菌株分別為：29、21、

8、2、9、25株；每年CPNG耐藥率分別為：96．67%、70．00%、10．00%、30．00%、83．33%。；CPNG在2004-2008年間的耐藥平均率為58．00%。6．CPNG的耐藥類型：均為染色體介導，為380bp大小的gyrA基因（DNA回旋酶A亞單位編碼序列）。 結(jié)論：1．PPNG近五年（2004年-2008年）耐藥平均率（36．00%）較過去五年（2000年-2004年）（94．07%）下降58．07%，經(jīng)統(tǒng)計

9、學分析，有顯著性差異（X2=372．001，P<0．05），提示停用青霉素治療淋病后，NG對青霉素敏感性有上升趨勢。2．TRNG近五年（2004年-2008年）耐藥平均率（53．33%）較過去五年（2000年-2004年）（57．57%）下降2．24%，經(jīng)統(tǒng)計學分析，無顯著性差異（X2=0．265，P>0．05）。3．CPNG近五年（2004年-2008年）耐藥平均率（58．00%）較過去五年（2000年-2004年）（76．79%）下

10、降18．79%，經(jīng)統(tǒng)計學分析，有顯著性差異（X2=249．197，P<0．05），提示停用環(huán)丙沙星治療淋病后，NG對環(huán)丙沙星敏感性有上升趨勢。4．2004年和2008年成都地區(qū)PPNG耐藥以染色體介導為主，為340bp的penA基因介導，2005和2007年PPNG耐藥以質(zhì)粒介導為主，為535bp的TEM基因介導。5．2004-2008年間成都地區(qū)TRNG耐藥以質(zhì)粒介導為主，主要為501bp的tetM基因介導。6．2004年-2008年