微小染色體維持蛋白2、5、7在卵巢上皮性腫瘤中的表達(dá)與意義.pdf

1、目的：
　　 卵巢惡性腫瘤是女性生殖器三大惡性腫瘤之一，至今缺乏有效的早期診斷方法，約60％的病人發(fā)現(xiàn)時(shí)已有廣泛的腹膜轉(zhuǎn)移和大量腹水，而對于晚期者，又缺乏有效治療，5年存活率仍較低，因此卵巢癌已成為嚴(yán)重威脅婦女生命的腫瘤之一。關(guān)于卵巢癌報(bào)道最多的顯著預(yù)后指標(biāo)包括疾病分期、腫瘤分級、組織類型和外科減滅術(shù)的范圍。然而，還存在一個(gè)問題，即同樣的預(yù)后亞群中存在顯著的生物學(xué)異質(zhì)性，這會影響各個(gè)病例臨床預(yù)后的準(zhǔn)確性。因此，我們必須更進(jìn)一步的

2、了解卵巢癌生物學(xué)行為相關(guān)的分子決定物，以便鑒定出存在特別不良預(yù)后的患者群。微小染色體維持蛋白（mimchromosome maintenance proteins，MCMs）是DNA復(fù)制啟動(dòng)和延伸的必需因子之一，MCM蛋白的陽性表達(dá)是細(xì)胞具有增殖能力的重要標(biāo)志。其在消化、呼吸、泌尿、生殖系統(tǒng)等各種不同類型的腫瘤組織中都有異常的表達(dá)，且表達(dá)水平與細(xì)胞增殖程度成正相關(guān)，而與腫瘤組織的分化程度呈負(fù)相關(guān)，可作為腫瘤和癌前病變的標(biāo)志物，也可作為腫

3、瘤預(yù)后評價(jià)的參考指標(biāo)。與PCNA、Ki-67等傳統(tǒng)評價(jià)指標(biāo)相比，是一種更理想的細(xì)胞增殖標(biāo)記物，更能準(zhǔn)確地反映細(xì)胞的增殖活性。
　　 本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用免疫組化方法觀察卵巢上皮性腫瘤組織中MCM2、MCM5和MCM7蛋白的表達(dá)，了解其與卵巢癌的臨床病理特征、常用的增殖因子Ki-67和病人預(yù)后情況的關(guān)系，探討其分子生物學(xué)和臨床意義。
　　 材料與方法：
　　 1.組織標(biāo)本
　　 收集2005年3月至2008年10月在

4、中國人民解放軍第二0二醫(yī)院病理科術(shù)后存檔的96例卵巢上皮性腫瘤組織石蠟標(biāo)本，其中卵巢上皮性癌55例、交界性上皮性腫瘤29例、良性上皮性腫瘤12例，所有患者手術(shù)前均未進(jìn)行化療、放療或其他抗癌治療。全部卵巢癌病例進(jìn)行隨訪，平均隨訪時(shí)間30個(gè)月，最短8個(gè)月死亡，最長隨訪時(shí)間50個(gè)月。
　　 2.免疫組化
　　 采用鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶免疫組化（S-P法），檢測96例卵巢上皮性腫瘤組織中MCM2、MCM5、MCM7和K

5、i-67蛋白的表達(dá)。結(jié)果判定：每張切片在低倍鏡下選擇5個(gè)陽性細(xì)胞最密集、背景最清晰區(qū)域，每個(gè)區(qū)域在高倍鏡下計(jì)算100個(gè)細(xì)胞中陽性細(xì)胞數(shù)，取5個(gè)區(qū)域陽性細(xì)胞數(shù)的平均值作為其標(biāo)記指數(shù)。陰性（-）：標(biāo)記指數(shù)<10％；弱陽性（+）：標(biāo)記指數(shù)10％～25％；陽性（++）：標(biāo)記指數(shù)25％～50％；強(qiáng)陽性（+++）：陽性細(xì)胞數(shù)≥50％。以陽性細(xì)胞數(shù)≥25％為陽性病例。
　　 3.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
　　 采用SPSS（V13.0）軟件數(shù)據(jù)進(jìn)行

6、X2檢驗(yàn)、Wilcoxon秩和檢驗(yàn)、Spearman等級相關(guān)分析、Kruskal Wallis檢驗(yàn)、Mann-Whitney檢驗(yàn)和Log Rank檢驗(yàn)。取α=0.05為標(biāo)準(zhǔn)，p<0.05為有差異性，p<0.01為有顯著性差異。
　　 結(jié)果：
　　 1、MCM2、MCM5、MCM7和Ki-67蛋白在卵巢上皮腫瘤組織中表達(dá)情況
　　 在全部病例中MCM2、MCM5、MCM7和Ki-67蛋白的表達(dá)的平均數(shù)分別為17.0

7、4％、19.79％、21.19％和15.45％。染色的區(qū)域主要集中在細(xì)胞核，部分病例中細(xì)胞質(zhì)也呈現(xiàn)比較模糊的染色，這種染色在評價(jià)時(shí)忽略不計(jì)。MCM2、MCM5、MCM7和Ki-67蛋白標(biāo)記指數(shù)的平均數(shù)在良性腫瘤（3.58％、4.50％、4.42％和3.58％）、交界性腫瘤（6.52％、8.00％、9.21％和5.38％）和腺癌（25.53％、29.35％、31.18％和23.36％）中總體分布均有差異（Kruskal-Wallis檢驗(yàn)，

8、P<0.001）。其中MCM2、MCM5、MCM7和Ki-67蛋白在腺癌與良性腫瘤和交界性腫瘤的表達(dá)有顯著差異（P<0.001），在交界性腫瘤與良性腫瘤的表達(dá)，僅MCM7蛋白有差異性（P=0.002），其余兩種蛋白表達(dá)則沒有差異。
　　 2、MCM2、MCM5、MCM7蛋白在卵巢上皮性腫瘤組織中的表達(dá)與增殖因子Ki-67的相關(guān)性
　　 MCM2、MCM5、MCM7蛋白的表達(dá)水平與Ki-67的標(biāo)記指數(shù)呈強(qiáng)的正相關(guān)（Spea

9、rman’s檢驗(yàn)，相關(guān)系數(shù)均大于0.9，P<0.001）。并且在將病例分為良性腫瘤、交界性性腫瘤或者腺癌之后，這種相關(guān)性仍然存在。從相關(guān)系數(shù)來看，Ki-67LI同另外三個(gè)指標(biāo)中的MCM2LI最相關(guān)。
　　 3、MCM2、MCM5和MCM7蛋白的表達(dá)與卵巢上皮性癌患者臨床病理特征的關(guān)系
　　 MCM2、MCM5和MCM7蛋白的標(biāo)記指數(shù)隨腫瘤的分級增高而增加，其在不同分化程度的腫瘤組織中總體有差異（1 vs 2 vs 3，K

10、ruskal-Wallis檢驗(yàn)：P均小于0.001）。MCM2、MCM5和MCM7蛋白的標(biāo)記指數(shù)在不同臨床分期中總體上存在差異（Ⅰ vs Ⅱ vs Ⅲ vs Ⅳ，Kruskal Wallis檢驗(yàn)：P均小于0.001）。用Mann-Whitney檢驗(yàn)觀察到，在Ⅲ與Ⅳ期比較，MCM5LI、MCM7LI有差別（P<0.001），另外兩個(gè)指標(biāo)均無有差別。
　　 4、MCM2、MCM5和MCM7蛋白的表達(dá)與卵巢上皮性癌患者預(yù)后的關(guān)系

11、>　　 MCM2蛋白表達(dá)陰性組中位生存時(shí)間為43個(gè)月，陽性組中位生存時(shí)間為35.4個(gè)月，經(jīng)Log Rank，結(jié)果統(tǒng)計(jì)量卡方值為8.605，p=0.003<0.05，故認(rèn)為兩組生存時(shí)間有差別，陰性組高。MCM5蛋白表達(dá)組陰性組中位生存時(shí)間為45.1個(gè)月，陽性組中位生存時(shí)間為34.6個(gè)月，經(jīng)Log Rank，結(jié)果統(tǒng)計(jì)量卡方值為15.032，p=.000<0.05，故認(rèn)為兩組生存時(shí)間有差別，陰性組高。MCM7蛋白表達(dá)陰性組中位生存時(shí)間為40

12、.7個(gè)月，陽性組中位生存時(shí)間為29個(gè)月，經(jīng)Log Rank，結(jié)果統(tǒng)計(jì)量卡方值為14.595，p=.000<0.05，故認(rèn)為兩組生存時(shí)間有差別，陰性組高。
　　 結(jié)論：
　　 1、在卵巢上皮性腫瘤中，MCM2、MCM5和MCM7蛋白的表達(dá)從良性到癌呈漸進(jìn)性增高，有助于區(qū)分卵巢上皮性腫瘤的良惡性。
　　 2.MCM2、MCM5和MCM7蛋白的表達(dá)隨卵巢癌臨床分期的升高而升高，隨腫瘤分化程度降低而升高。