不同時(shí)間灌服纈沙坦對(duì)大鼠內(nèi)皮素與一氧化氮近日節(jié)律的影響.pdf

1、目的：生物節(jié)律是生物體周期性、規(guī)律性的生命活動(dòng)現(xiàn)象，是生物體的基本特征之一，也是生物體重要的生命活動(dòng)調(diào)節(jié)方式。在人類和其他動(dòng)物中，大腦內(nèi)形成的內(nèi)在生物鐘可調(diào)節(jié)睡眠周期、體溫、血壓波動(dòng)周期以及各種內(nèi)分泌腺體的分泌節(jié)律等重要生命活動(dòng)。依照節(jié)律的周期長(zhǎng)短可將之分為三種類型：1、近日節(jié)律(Circadian Rhythm，或稱晝夜節(jié)律，Diurnal Rhythm)，節(jié)律周期接近24小時(shí)；2、超日節(jié)律(Ultradian Rhythm)，節(jié)律周

2、期明顯短于24小時(shí)；3、亞日節(jié)律(Infradian Rhythm)，節(jié)律周期顯著長(zhǎng)于24小時(shí)。在人類最為常見且研究最多的是近日節(jié)律<'[1]>。人體血壓呈現(xiàn)為典型的近日節(jié)律性，充分認(rèn)識(shí)血壓的生物節(jié)律的調(diào)節(jié)機(jī)制對(duì)于更好的防治高血壓病具有重要意義。血壓水平的調(diào)節(jié)是一個(gè)非常復(fù)雜的過程。在這個(gè)過程中，內(nèi)皮系統(tǒng)以及其他血管活性物質(zhì)等起著至關(guān)重要的作用。近年來心血管領(lǐng)域最重要的研究進(jìn)展之一在于闡明了血管內(nèi)皮活性因子在調(diào)節(jié)心臟、循環(huán)功能和內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定

3、中的作用，如保持血管張力、抑制血小板聚集、維持機(jī)體凝血纖溶平衡、降低血管內(nèi)皮通透性、減少黏附分子的表達(dá)、抑制血管平滑肌增殖等。研究表明，內(nèi)皮素(ET)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)等物質(zhì)的血漿濃度或活性均存在晝夜節(jié)律現(xiàn)象，且其時(shí)間生物學(xué)特征與心血管系統(tǒng)疾病的晝夜分布密切相關(guān)。因此，充分認(rèn)識(shí)這類生物節(jié)律，對(duì)于深入理解血管內(nèi)皮功能與心血管系統(tǒng)生理現(xiàn)象及病理事件的關(guān)系具有重要意義，對(duì)于改善心血管疾病的治療現(xiàn)狀、減少惡性心臟事件的發(fā)

4、生亦具有重要價(jià)值。目前僅有少數(shù)作者對(duì)上述物質(zhì)的分子表達(dá)水平的近日節(jié)律作了研究，血管活性物質(zhì)的晝夜波動(dòng)與血壓晝夜節(jié)律之間的關(guān)系亦有待深入探討，且纈沙坦對(duì)血管活性物質(zhì)的時(shí)間生物學(xué)(Chronobiology)特征的影響亦有待于深入探討。本研究以纈沙坦不同喂藥時(shí)間方案為干預(yù)因素，檢測(cè)不同服藥時(shí)間對(duì)大鼠血清及心肌組織ET-1、NO、NOS的表達(dá)量，及心肌組織中eNOS基因表達(dá)量的晝夜節(jié)律的影響，分析三組對(duì)象上述指標(biāo)近日節(jié)律特征與血壓的晝夜節(jié)律性

5、及其相互關(guān)系，對(duì)從分子水平解釋不同服藥時(shí)間對(duì)大鼠動(dòng)脈血壓的近日節(jié)律的影響，甚至進(jìn)一步解釋人類血壓近日節(jié)律的變化與不同服藥時(shí)間的關(guān)系的分子生物學(xué)機(jī)制；對(duì)調(diào)整高血壓患者服藥時(shí)間，糾正異常的生物節(jié)律，恢復(fù)血壓的生理波動(dòng)將具有重要價(jià)值。為高血壓病及其并發(fā)癥的防治提供一個(gè)新思路。 方法：清潔級(jí)健康雄性SD大鼠96只。隨機(jī)分為三大組：早07：00灌藥組(M)，晚07：00灌藥組(N)和空白對(duì)照組(C)。灌藥組每日給予纈沙坦30mg/Kg灌胃

6、。每大組各32只。每大組又隨機(jī)分4小組，每組各8只。按上述方案飼養(yǎng)喂藥4周后，分別于同日24小時(shí)內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)(02：00，08：00，14：00，20：00) 用鼠尾測(cè)壓計(jì)測(cè)各組大鼠血壓并處死C組、M組、N組中的各一小組大鼠。分別檢測(cè)大鼠血漿及心肌組織ET-1、血清及心肌組織NO、eNOS的表達(dá)量以及心肌組織eNOS-mRNA的表達(dá)水平。應(yīng)用余弦擬合法分析3組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血清及心肌組織中各指標(biāo)含量的時(shí)間生物學(xué)特征，采用零振幅檢驗(yàn)(zero

7、amplitude test)評(píng)價(jià)各檢測(cè)指標(biāo)的近日節(jié)律是否確實(shí)存在，應(yīng)用方差分析法比較各均值之間差異的顯著性，P≤0.05視為有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異。 結(jié)果： 1 方差分析顯示，血漿、心肌組織中ET-1表達(dá)量的晝夜平均水平：M組和N組低于C組，并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，而M、N兩組之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.215)。提示纈沙坦可以影響大鼠ET-1的表達(dá)量：早晚不同時(shí)間喂藥大鼠血漿、心肌組織中ET-1水平顯著降低；

8、早晚喂藥組間對(duì)ET-1的影響無差別。 2 方差分析顯示，血清、心肌組織中NO、eNOS表達(dá)量的晝夜平均水平：M組和N組高于C組，除血清NO含量在N組與C組之間的差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.446)之外，灌藥組均較正常對(duì)照組明顯升高。 3 不同時(shí)間灌服纈沙坦后，大鼠心肌組織eNOS-mRNA表達(dá)量的平均水平，方差分析顯示：M組和N組高于C組，但是三組之間的差別均沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，在各個(gè)時(shí)點(diǎn)的表達(dá)量的平均水平的差別也無統(tǒng)計(jì)學(xué)差

9、異(P>0.05)。 4 不同時(shí)間灌服纈沙坦后，鼠尾收縮壓晝夜平均水平：M組和N組低于C組，且三組之間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 5 余弦擬合分析及零振幅檢驗(yàn)顯示，C組、M組、N組大鼠血漿ET-1，血清NO、eNOS，心肌組織中ET-1、NO、eNOS、eNOS-mRNA及血壓檢測(cè)值均呈現(xiàn)出典型的近日節(jié)律性。C組血漿ET-1，血清NO、eNOS的峰值依次出現(xiàn)于22：33、9：07、10：54，M組的峰值提前出

10、現(xiàn)，三者的峰值時(shí)刻依次為18：23、4：49、4：27，N組三者峰值時(shí)刻依次為21：14、4：40、2：45。血清NO、eNOS及心肌組織eNOS-mRNA在M組和N組余弦曲線的振幅均較C組的振幅增高，血漿ET-1振幅降低，提示灌藥組大鼠的血清NO、eNOS的整體水平較正常對(duì)照組增高，而ET-1則降低。心肌組織中ET-1、NO、eNOS、eNOS-mRNA的余弦擬合曲線的節(jié)律的峰值時(shí)刻及振幅水平與血清的趨勢(shì)基本一致，C組心肌組織ET-1

11、、NO、eNOS的峰值依次出現(xiàn)于12：14、8：23、11：27，M組的峰值提前出現(xiàn)，三者的峰值時(shí)刻依次為10：11、2：14、3：21，N組三者峰值時(shí)刻依次為16：29、3：46、3：29。 6 余弦擬合分析及零振幅檢驗(yàn)顯示，C組、M組、N組大鼠心肌組織中eNOS-mRNA呈現(xiàn)出典型的近日節(jié)律性。C組、M組、N組大鼠心肌組織中eNOS-mRNA的峰值分別出現(xiàn)于15：37、20：38、20：36。M組、N組的振幅明顯高于C組。

12、7 余弦擬合分析及零幅檢驗(yàn)顯示，C組、M組、N組大鼠血壓均呈現(xiàn)出典型的近日節(jié)律性，三者峰值時(shí)刻依次為23：26、10：27、17：00。M組振幅較C組的升高，而N組則較C組降低。 結(jié)論： 1.未灌藥的大鼠血漿、心肌組織中ET-1、NO、eNOS的表達(dá)量存在典型的晝夜節(jié)律特征，心肌組織中eNOS-mRNA的表達(dá)也呈現(xiàn)明顯晝夜節(jié)律。 2.不同時(shí)間灌服纈沙坦后，大鼠血漿、心肌組織中ET-1含量明顯降低，NO、eNOS及

13、心肌組織中eNOS-mRNA含量明顯升高，并且晝夜節(jié)律特征更加明顯。 3.早晨灌服纈沙坦較夜間灌服，更能增加NO、eNOS、eNOS-mRNA的表達(dá)量，降低血壓平均水平及ET-1的表達(dá)，并且能更好的恢復(fù)其晝夜節(jié)律性。上述結(jié)果表明，大鼠血及心肌組織內(nèi)ET-1、NO、eNOS的表達(dá)量及心肌組織eNOS-mRNA的表達(dá)水平均具有典型的晝夜節(jié)律特征，且各指標(biāo)之節(jié)律特征相似。纈沙坦早晚不同時(shí)間喂藥影響大鼠各測(cè)量值的近日節(jié)律，早晨喂藥比晚上