微囊化同種異體坐骨神經(jīng)組織細胞移植對脊髓損傷大鼠膠質細胞MHCⅡ表達的影響.pdf

1、目的：脊髓損傷(spinal cord iniury，SCI)后于損傷處移植周圍神經(jīng)或雪旺細胞(Schwann cells，SCs)能夠促進神經(jīng)元的存活、軸突的再生及功能恢復。微囊技術是近幾十年發(fā)展起來的一種免疫隔離技術，可以有效隔離大分子免疫活性物質，使囊內(nèi)細胞免受宿主免疫系統(tǒng)攻擊，然而對微囊是否可以阻止或影響抗原遞呈卻鮮有研究。本實驗擬通過觀察微囊包被的同種異體神經(jīng)組織細胞移植到受損脊髓后的主要組織相容性抗原(Major Histo

2、compability antigen，MHC)Ⅱ類分子即MHC Ⅱ的表達情況，探討微囊對移植排斥的作用以及受損脊髓修復的可能機制。 方法：取健康成年Wistar大鼠32只，體重200～250g；健康成年sprague-Dawley(sD)大鼠96只，體重200～250g，雌雄不限，隨機分為4組：A組(微囊化坐骨神經(jīng)組織細胞移植組，n=24)；aM(組織細胞懸液移植組，n=24)；C組(空囊組，n=24)；D組(單純損傷組，n=

3、24)。分好組后對各組大鼠行右后肢運動功能改良Tarlov評分[42]。無菌條件下取成年Wistar大鼠預變性處理的雙側坐骨神經(jīng)干制成組織細胞懸液，低速離心后與1.5％海藻酸鈉溶液混合并噴入20mmol/L的氯化鋇溶液中制成微囊化坐骨神經(jīng)組織細胞懸液。A、B、C、D組建立大鼠T8脊髓右半橫斷損傷模型，并分別在損傷處移入吸附10μl的微囊化組織細胞懸液的明膠海綿、組織細胞懸液的明膠海綿及空微囊的明膠海綿，D組只填充明膠海綿。術后10、21

4、、35、60天，各組每時相取6只大鼠行右后肢運動功能改良Tarlov評分后被麻醉用4％多聚甲醛經(jīng)心灌注，截取移植部位或損傷節(jié)段約1cm長脊髓組織及相應脊神經(jīng)節(jié)。石蠟切片后行HE及MHC II免疫組化染色。 結果：B組(組織細胞懸液移植組)術后10d、21d時，脊髓MHC Ⅱ陽性細胞的數(shù)量較其余3組明顯增多，21d時更為顯著(P<0.05)，35d時MHC II表達下降，與21d相比有差異(P<0.05)。21d和35d時部分移植

5、區(qū)出現(xiàn)大量炎性細胞浸潤，60d時移植區(qū)未見神經(jīng)元數(shù)量明顯增多，仍多見炎細胞浸潤和神經(jīng)膠質細胞增生。A組(微囊化坐骨神經(jīng)組織細胞移植組)組在10d、21d時，移植區(qū)MHC Ⅱ陽性細胞數(shù)量較B組明顯減少(P<0.05)，35d時微囊組炎性反應減輕，出現(xiàn)大量具有神經(jīng)元特征的細胞；60d時MHC Ⅱ陽性細胞的數(shù)量較35d有所增加(P>0.05)，可見少量炎性細胞，神經(jīng)元形態(tài)正常，數(shù)量較多。C(空囊對照組)、D組(單純損傷組)在10 d、21 d

6、時，見少量MHC Ⅱ陽性細胞，35d時明顯減少(P<0.05)，60天消失。C、D兩組各時相無明顯差異(P>0.05)。4組大鼠脊神經(jīng)節(jié)各時相均未見MHC Ⅱ分子表達。右后肢運動功能改良Tarlov評分各組術前正常，SCI后第10天均在1分左右，各組間統(tǒng)計無明顯差異；之后評分逐漸升高，21天時A組與B、C、D組比較有差異(P<0.05)；35、60天時A組升高程度較B、C、D組要大，差異有顯著性(P<0.01)，但未達到正常水平。大鼠右

7、后肢運動功能有不同程度的恢復，以微囊組恢復最好。 結論：同種異體坐骨神經(jīng)組織細胞移植脊髓移植區(qū)高表達MHC Ⅱ抗原，提示同種異體坐骨神經(jīng)組織細胞移植存在免疫排斥反應；海藻酸鈉—氯化鋇微囊處理后在一定程度上可以減少脊髓膠質細胞MHC Ⅱ抗原分子的表達，減弱對同種異體抗原的抗原遞呈作用和免疫排斥反應；脊髓膠質細胞MHC Ⅱ的表達的變化與移植部位的炎細胞浸潤程度相一致，提示脊髓膠質細胞MHC Ⅱ的表達的變化與移植部位的免疫排斥反應程度