高遷移率族蛋白B1在藥物性肝損害中的表達(dá)情況及藥物干預(yù)的療效觀察.pdf

1、目的：研究高遷移率族蛋白B1(high mobility group box protein1，HMGB1)在四氯化碳引起大鼠藥物性肝損害發(fā)生中的作用；探討HMGB1與肝功能指標(biāo)之間的關(guān)系；評(píng)價(jià)甘草酸二銨(Diammonium Glycyrrhizinate，DGL)及腺苷蛋氨酸(S-adenosylmethionine，SAMe)對(duì)大鼠藥物性肝損害的療效。
　　 方法：選取Wistar大鼠80只(200±20g，雌雄各半)，常

2、規(guī)飼養(yǎng)1周后隨機(jī)分成A、B、C、D、E、F、G、H八組，每組10只。A組單獨(dú)給予生理鹽水灌胃，B、C、D、E、F、G、H組給予首次皮下注射50％四氯化碳油溶劑5ml/kg，而后皮下注射50％四氯化碳油溶劑2.5ml/kg，每周2次，制造藥物性肝損害模型。C、D、E組造模的同時(shí)給予藥物干預(yù)，C組給予甘草酸二銨375mg/kg/d灌胃，共四周；D組給予腺苷蛋氨酸0.833g/kg/d灌胃，共四周；E組同時(shí)給予甘草酸二銨375mg/kg/d和

3、腺苷蛋氨酸0.833g/kg/d灌胃，共四周。F、G、H組造模兩周后停止皮下注射50％四氯化碳油溶劑，開(kāi)始給予藥物治療。F組給予甘草酸二銨375mg/kg/d灌胃，共兩周；G組給予腺苷蛋氨酸0.833g/kg/d灌胃，共兩周;H組同時(shí)給予甘草酸二銨375mg/kg/d和腺苷蛋氨酸0.833g/kg/d灌胃，共兩周。造模四周后全部大鼠給予禁食，并行股動(dòng)脈放血處死，收集血液標(biāo)本并取動(dòng)物肝臟為標(biāo)本制作蠟塊。分別檢測(cè)：(1)血清肝功能指標(biāo)：谷丙

4、轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、總膽紅素(TBIL)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)；(2)免疫組織化學(xué)法檢測(cè)HMGB1在各組肝組織中的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：
　　 1 肝組織病理學(xué)改變
　　 四周后各組肝組織免疫組織化學(xué)法后病理學(xué)改變：A組可見(jiàn)肝細(xì)胞大小如常，肝細(xì)胞索排列規(guī)整，細(xì)胞漿未見(jiàn)明顯的棕褐色顆粒沉著。B組可見(jiàn)肝細(xì)胞明顯腫脹，肝細(xì)胞索排列紊亂，點(diǎn)灶狀壞死明顯，還可見(jiàn)彌漫性肝細(xì)胞脂肪變性，脂變的肝細(xì)胞

5、體積增大，脂肪空泡明顯，胞核被推向周邊，細(xì)胞漿可見(jiàn)大片深染的棕褐色顆粒沉著。C組可見(jiàn)肝細(xì)胞腫脹，肝細(xì)胞索排列欠規(guī)整，可見(jiàn)點(diǎn)灶狀壞死，未見(jiàn)明顯脂肪空泡，細(xì)胞漿可見(jiàn)散在分布的棕褐色顆粒沉著。D組可見(jiàn)肝細(xì)胞腫脹，肝細(xì)胞索排列欠規(guī)整，偶見(jiàn)點(diǎn)狀壞死及脂肪空泡，細(xì)胞漿可見(jiàn)散在分布的棕褐色顆粒沉著。E組可見(jiàn)肝細(xì)胞腫脹，肝細(xì)胞索排列欠規(guī)整，脂肪空泡散在分布，細(xì)胞漿可見(jiàn)散在分布的棕褐色顆粒沉著。F組可見(jiàn)肝細(xì)胞輕度腫脹，肝細(xì)胞索排列較規(guī)整，可見(jiàn)零散分布的點(diǎn)

6、灶狀壞死及脂肪空泡，細(xì)胞漿可見(jiàn)散在分布的淺褐色顆粒沉著。G組可見(jiàn)肝細(xì)胞輕度腫脹，肝細(xì)胞索排列較規(guī)整，可見(jiàn)少許的點(diǎn)灶狀壞死及脂肪空泡，細(xì)胞漿可見(jiàn)散在分布的淺褐色顆粒沉著。H組可見(jiàn)肝細(xì)胞輕度腫脹，肝細(xì)胞索排列較規(guī)整，未見(jiàn)明顯的點(diǎn)灶狀壞死及脂肪空泡，細(xì)胞漿可見(jiàn)少許淺褐色顆粒沉著。
　　 2 肝功能指標(biāo)
　　 A、B、C、D、E、F、G、H組肝功能指標(biāo)ALT的均值分別為45.75±8.08U/L、432.12±116.01U/L

7、、71.25±14.50U/L、105.75±32.66U/L、87.67±36.49U/L、44.80±8.77U/L、50.00±8.73U/L、48.20±8.99U/L;AST的均值分別為144.50±22.56U/L、130.50±9.25U/L、173.00±21.71U/L、187.38±40.11U/L、149,00±30.78U/L、139、40±8.50U/L、135.70±11.22U/L、728.63±335.3

8、6U/L;TBIL的均值分別為0.06±0.19umol/L、25.28±21.18umol/L、3.15±3.79umol/L、2.59±3.37umol/L、3.23±3.3umol/L、0.01±0.03umol/L、0umol/L、0.01±0.03umol/L;GGT的均值分別為4.47±3.12u/L、16.98±9.97u/L、3.79±2.28u/L、3.78±2.03u/L、3.75±1.67u/L、2.05±1.66

9、u/L、2.44±1.85u/L、1.17±1.13u/L。B組血清ALT、AST、TBIL及GGT的水平與A、C、D、E組相比較均有明顯升高(P＜0.05)，A、C、D、E各組之間血清ALT、AST、TBIL及GGT水平無(wú)明顯差別(P＞0.05)；A、F、G、H組血清ALT、AST、TBIL及GGT的水平亦無(wú)明顯差別（P＞0.05）。
　　 3 HMGB1表達(dá)水平的測(cè)定
　　 A、B、C、D、E、F、G、H組HMGB1

10、的OD值分別為：10003.08±846.71、29711.96±7826.83、16092.66±2308.52、18948.78±4495.19、15221.1±4633.58、11348.65±1192.3、12172.38±1451.77、10829.43±1310.7。模型組HMGB1表達(dá)水平最高，明顯高于藥物預(yù)防組和藥物治療組（P＜0.05）。而對(duì)照組與其他各組之間相比，HMGB1的表達(dá)水平無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。

11、r>　　 4 肝功能指標(biāo)與HMGB1表達(dá)水平的相關(guān)性
　　 ALT與HMGB1的相關(guān)系數(shù)為0.922，(P＜0.05)；AST與HMGB1的相關(guān)系數(shù)為0.829，（P＜0.05）。ALT和AST與HMGB1存在正相關(guān)關(guān)系，TBIL、GGT與HMGB1無(wú)明顯相關(guān)性。
　　 結(jié)論：
　　 1 HMGB1作為炎癥因子參與大鼠藥物性肝損害的炎癥反應(yīng)；
　　 2 HMGB1表達(dá)水平與肝功能損害程度呈正比例關(guān)系；<