甲醛誘導(dǎo)小鼠生殖發(fā)育毒性及其機理研究.pdf

1、目的：本課題擬從體內(nèi)動物實驗、體外胚胎培養(yǎng)、細胞水平和分子水平探討甲醛(Formaldehyde，F(xiàn)A)的生殖發(fā)育毒性，闡明其機理，為進一步研究甲醛對機體的遠期效應(yīng)和制定甲醛安全性評價標(biāo)準(zhǔn)提供實驗依據(jù)。方法：體內(nèi)動物實驗應(yīng)用經(jīng)胎盤遺傳毒性試驗觀察甲醛對胎肝血微核率和胎肝染色體畸變率的影響。體外實驗是將孕8.5天齡的昆明種小鼠脫頸處死，分離胚胎，采用全胚胎培養(yǎng)技術(shù)(wholeembryoculture，WEC)，將其置入含有不同濃度甲醛(

2、0，3，9，27，81μmol/L)的大鼠即刻離心血清(immediatelycentrifugalserum，ICS)中旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)48小時，利用光學(xué)顯微鏡、解剖顯微鏡、中性紅活體染色、組織切片HE染色及流式細胞儀等技術(shù)，觀察甲醛對體外培養(yǎng)小鼠胚胎生長發(fā)育和組織器官形態(tài)分化的影響；為了研究甲醛生殖發(fā)育毒性的預(yù)防方法，在ICS中加入VitC，觀察VitC對甲醛誘導(dǎo)胚胎生長發(fā)育毒性的干預(yù)作用；應(yīng)用分光光度法觀察甲醛對胚胎組織谷光甘肽(glut

3、athion，GSH)含量和脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量的影響以分析其機制。結(jié)果：1.甲醛可通過胎盤屏障誘導(dǎo)胎鼠的染色體損傷。2.甲醛能影響體外器官形成期的昆明種小鼠胚胎生長發(fā)育，具有一定的胚胎毒性，呈劑量-效應(yīng)關(guān)系和時間-效應(yīng)關(guān)系，以神經(jīng)管閉合不全、體位翻轉(zhuǎn)不全、腦部形態(tài)異常、心臟發(fā)育遲緩等畸形為特征；甲醛可致VYS及胚胎神經(jīng)管、腦組織、心臟等結(jié)構(gòu)明顯受損，各濃度組胚胎畸形部位細胞經(jīng)流式細胞儀檢測

4、發(fā)現(xiàn)甲醛可引起小鼠胚胎細胞周期發(fā)生變化，且出現(xiàn)典型的亞二倍體凋亡峰；中性紅活體染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)，甲醛染毒組，胚胎腦部、眼、鰓弓、心、肢芽、體節(jié)、尾部等部位出現(xiàn)大量的死亡細胞。3.甲醛能引起胚胎組織中GSH含量下降和脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA含量升高。4.VitC能有效地干預(yù)甲醛的胚胎生長發(fā)育毒性。結(jié)論：1.甲醛對體外培養(yǎng)的8.5天齡昆明種小鼠胚胎具有直接的胚胎毒性和致畸性。2.甲醛損傷卵黃囊結(jié)構(gòu)和功能；能影響小鼠胚胎細胞周期分布，干擾胚胎細胞正常