異氟烷對(duì)原代培養(yǎng)的缺氧-復(fù)氧損傷心肌細(xì)胞活性氧及線粒體通透性轉(zhuǎn)換的影響.pdf

1、目的: 在原代培養(yǎng)SD乳鼠心肌細(xì)胞上觀察揮發(fā)性麻醉劑異氟烷(Isoflurane，Iso)對(duì)缺氧/復(fù)氧（Hypoxia/Reoxygenation，H/R）損傷心肌細(xì)胞活性氧（Reactive oxygen species，ROS）及線粒體通透性轉(zhuǎn)換（Mitochondrial permeability transition，MPT）的影響。
　　 方法: 1~3日齡SD乳鼠心肌細(xì)胞原代培養(yǎng)48h后，采用三氣培養(yǎng)箱建立缺氧/復(fù)氧

2、（H/R）模型。將培養(yǎng)細(xì)胞按孔隨機(jī)分為7組（n＝6）,并在心肌細(xì)胞缺氧期給予揮發(fā)性麻醉劑Iso和線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔（Mitochondrial permeability transition pore，MPTP）開放劑蒼術(shù)苷（Atractyloside, Atra)處理：（1）Normal組：在37℃的CO2培養(yǎng)箱中孵育心肌細(xì)胞5h（95％ Air + 5％ CO2）；（2）H/R組：缺氧（95％ N2 + 5％ CO2 , FiO2﹤

3、1％）3h，復(fù)氧（95％ Air + 5％ CO2）2h；（3）Atra組：缺氧3h，缺氧期給予20μM的Atractyloside，復(fù)氧2h；（4）Iso0.1組：缺氧3h，缺氧期給予0.1mM Isoflurane，復(fù)氧2h；（5）Iso0.2組：缺氧3h，缺氧期給予0.2mM Isoflurane，復(fù)氧2h；（6）Iso0.4組：缺氧3h，缺氧期給予0.4mM Isoflurane，復(fù)氧2h；（7）Iso0.4+ Atra組：缺氧

4、3h，缺氧期給予0.4mM Iso 和20μM的Atra，復(fù)氧2h。復(fù)氧30min后，采用DCFH-DA熒光法檢測(cè)心肌細(xì)胞內(nèi)活性氧生成；復(fù)氧50min后，以Calcein-AM染色心肌細(xì)胞，觀察心肌細(xì)胞內(nèi)線粒體MPTP的開放情況；復(fù)氧2h后，采用MTT法、TUNEL法觀察心肌細(xì)胞活力、凋亡情況。
　　 結(jié)果: 復(fù)氧2h后，Normal組、 Iso0.1組、Iso0.2組、Iso0.4組、Iso0.4+ Atra組的吸光度明顯高于

5、H/R組、Atra組（P < 0. 01）；H/R組吸光度與Atra組比較，差異無顯著性（P > 0.05）。Normal組、Iso0.1組、Iso0.2組、Iso0.4組、Iso0.4+ Atra組細(xì)胞凋亡明顯少于H/R組和Atra組；H/R組凋亡與Atra組差異無顯著性。Normal組、Iso0.1組、Iso0.2組、Iso0.4組、Iso0.4+ Atra組活性氧的生成明顯少于H/R組和Atra組；H/R組活性氧生成與Atra組差

6、異無顯著性。復(fù)氧50 min后，Normal組、H/R組、Atra組、Iso0.1組、Iso0.2組、Iso0.4組、Iso0.4+ Atra組Calcein保留在線粒體內(nèi)，胞漿熒光強(qiáng)度較弱；H/R組、Atra組Calcein從線粒體釋放到胞漿，胞漿熒光強(qiáng)度較強(qiáng)。
　　 結(jié)論:
　　 （1）缺氧期Iso處理可以減少缺氧/復(fù)氧損傷引起的心肌細(xì)胞凋亡，保存細(xì)胞活力，產(chǎn)生明顯的心肌保護(hù)作用；
　　 （2）Iso處理產(chǎn)生