慢性ITP患者血小板鈣相關(guān)蛋白、載脂蛋白A、凋亡相關(guān)蛋白和活性氧簇的觀察.pdf

1、特發(fā)性血小板減少性紫癜（idiopathic thrombocytopenic purpura，ITP）是一種臨床常見(jiàn)的出血性疾病，約占出血性疾病總數(shù)的30％。其臨床特點(diǎn)是無(wú)明顯外源性病因的血小板數(shù)量減少，從而出現(xiàn)出血癥狀，尤其以皮膚粘膜出血為主，嚴(yán)重者可有其它部位出血如鼻出血、牙齦滲血、婦女月經(jīng)量過(guò)多或嘔血、咯血、便血和尿血等癥狀，顱內(nèi)出血是本病的致死病因。根據(jù)年齡、疾病持續(xù)時(shí)間以及能否自行緩解，臨床上將ITP分為急性和慢性兩型，前者

2、多見(jiàn)于兒童，部分患者具有自限性；后者多出現(xiàn)于成人，女性多見(jiàn)，很少能自行緩解（自行緩解率≤5%），部分病例表現(xiàn)為間歇性發(fā)作與緩解交替，很難治愈。臨床上，急性ITP患者經(jīng)過(guò)腎上腺糖皮質(zhì)激素、靜脈應(yīng)用大劑量丙種球蛋白、促血小板生成藥物以及免疫抑制劑等方法治療后，大多數(shù)患者均能痊愈，治療效果比較理想。而慢性ITP患者上述措施治療后，患者的血小板計(jì)數(shù)有所上升，但在藥物減量或者停藥以后，患者的血小板計(jì)數(shù)再次下降，導(dǎo)致病情復(fù)發(fā)，很難徹底治愈。鑒于慢性

3、ITP的治療效果確實(shí)不令人滿意，所以研究慢性ITP的病理生理學(xué)發(fā)病機(jī)制就顯得極為重要。雖然國(guó)內(nèi)外普遍認(rèn)為慢性ITP的發(fā)病機(jī)制主要與免疫反應(yīng)有關(guān)，巨核細(xì)胞增殖發(fā)育成熟障礙和血小板生成障礙在慢性ITP的發(fā)病過(guò)程中也起著重要作用。但其詳細(xì)的病理生理學(xué)機(jī)制尚未完全闡明。鑒于慢性ITP的治療效果確實(shí)不令人滿意，所以研究慢性ITP的病理生理學(xué)發(fā)病機(jī)制就顯得極為重要。在本論文中采用流式細(xì)胞術(shù)觀察了慢性ITP患者血小板內(nèi)Ca2+、鈣連蛋白（calnex

4、in，CNX）、鈣網(wǎng)蛋白（calreticulin，CRT）、載脂蛋白A-II（apolipoprotein-II，ApoA-II）、載脂蛋白A-IV（apolipoprotein-IV，ApoA-IV）、凋亡相關(guān)蛋白以及活性氧簇（reactive oxygen species，ROS）的變化，為揭示慢性ITP的病理生理學(xué)機(jī)制提供參考，也為臨床防治慢性ITP的新療法提供理論依據(jù)。
　　【目的】
　　分析慢性ITP患者血小板內(nèi)

5、Ca2+、CNX、CRT、ApoA-II、ApoA-IV、凋亡相關(guān)蛋白以及ROS的表達(dá)情況，探討慢性ITP的病理生理學(xué)機(jī)制。
　　【方法】
　　2013年3月至2015年3月在汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院血液科門(mén)診和住院的20例慢性ITP患者，年齡20～55歲（平均年齡35.8歲），其中男性5例，女性15例。所有患者均根據(jù)《成人特發(fā)性血小板減少性紫癜診斷治療專(zhuān)家共識(shí)》的診斷標(biāo)準(zhǔn)確診，病程均在1年以上。體檢健康志愿者（健康對(duì)照）

6、20例，年齡20～55歲（平均年齡32.5歲），其中男性5例，女性15例，均為汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院體檢中心體檢健康人員。
　　分別采集上述20例慢性ITP患者和20例健康對(duì)照者的外周血，提取血小板。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)血小板內(nèi)Ca2+、CNX、CRT、ApoA-II、ApoA-IV、凋亡相關(guān)蛋白以及ROS的表達(dá)情況。
　　【結(jié)果】
　　1.血小板內(nèi)Ca2+、CNX和CRT的表達(dá)
　　流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)顯示，慢性I

7、TP患者表達(dá)Ca2+的血小板百分率為(74.19?19.40)%，顯著高于健康對(duì)照者[(22.79?10.47)%]（P<0.05）；慢性ITP患者表達(dá)CNX的血小板百分率為(15.10?7.32)%，顯著低于健康對(duì)照者[(41.79?14.45)%]（P<0.01）；慢性ITP患者表達(dá)CRT的血小板百分率為(25.11?12.66)%，亦顯著低于健康對(duì)照者[(38.58?12.02)%]（P<0.05）。
　　2.血小板內(nèi)Apo

8、A-II和ApoA-IV的表達(dá)
　　流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)顯示，慢性ITP患者表達(dá)ApoA-II的血小板百分率為(46.60?12.60)%，顯著高于健康對(duì)照者[(18.40?10.24)%]（P<0.05）；慢性ITP患者表達(dá)ApoA-IV的血小板百分率為(43.43?15.10)%，也顯著高于健康對(duì)照者[(16.49?10.13)%]（P<0.01）。
　　3.血小板內(nèi)凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)
　　流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)顯示，慢性 IT

9、P患者表達(dá) p38-MAPKs的血小板百分率為(61.66?19.38)%，顯著高于健康對(duì)照者[(27.52?14.34)%]（P<0.05）；慢性ITP患者表達(dá)Egr-1的血小板百分率為(62.22?20.48)%，也顯著高于健康對(duì)照者[(9.05?5.79)%]（P<0.05）；慢性ITP患者表達(dá)p53的血小板百分率為(56.82?20.07)%，顯著多于健康對(duì)照者[(4.35?2.04)%]（P<0.05）。慢性 ITP患者表達(dá)

10、Bcl-xL的血小板百分率為(5.38?1.52)%，顯著低于健康對(duì)照者[(21.20?6.04)%]（P<0.05）；慢性ITP患者表達(dá)Bak的血小板百分率為(39.86?11.45)%，顯著高于健康對(duì)照者[(20.82?11.85)%]（P<0.05）；慢性ITP患者表達(dá)Bax的血小板百分率為(36.85?15.99)%，也顯著高于健康對(duì)照者[(6.69?5.01)%]（P<0.05）。
　　4.血小板內(nèi)ROS的表達(dá)
　

11、　慢性ITP患者表達(dá)ROS的血小板百分率為(19.41?13.32)%，顯著高于健康對(duì)照者[(1.16?0.85)%]（P<0.05）。
　　【結(jié)論】
　　慢性ITP患者血小板內(nèi)的Ca2+、ApoA-II、ApoA-IV、p38-MAPKs、Egr-1、p53蛋白，Bcl相關(guān)蛋白Bak和Bax以及ROS的表達(dá)均增多，而CRT、CNX和Bcl-xL等的表達(dá)均減少。我們推測(cè)，血小板內(nèi)上述這些蛋白相互之間可能存在著一個(gè)網(wǎng)絡(luò)，通過(guò)這