兔甲狀腺近全切除術(shù)+131I清甲后短期甲減對(duì)動(dòng)脈內(nèi)膜損傷及阿托伐他汀干預(yù)研究.pdf

1、目的:
　　 1、通過(guò)對(duì)兔行甲狀腺近全切除術(shù)+131(I)清甲建立短期甲狀腺功能減退的動(dòng)物模型。
　　 2、觀察短期甲減對(duì)動(dòng)脈內(nèi)膜形態(tài)的影響，探討eNOS、ET-1表達(dá)在動(dòng)脈內(nèi)膜損傷中的作用。
　　 3、觀察阿托伐他汀對(duì)甲減狀態(tài)動(dòng)脈內(nèi)膜損傷的保護(hù)作用。
　　 方法:
　　 1、本實(shí)驗(yàn)選用新西蘭大白兔60只，雌雄各半，中位周齡9.2周（8～10周），平均體重1.7Kg(1.5～2.0Kg)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

2、飼養(yǎng)于河北省人民醫(yī)院動(dòng)物室，給予標(biāo)準(zhǔn)飼料，飲用自來(lái)水，室內(nèi)溫度15～25℃，濕度50％～60％，12h光照/12h暗循環(huán)。根據(jù)性別、周齡及體重隨機(jī)分成三組:(1)假甲狀腺切除術(shù)組（sham thyroidectomy group，ST組），行甲狀腺暴露后即刻縫合;(2)甲狀腺近全切除術(shù)組(Near-total thyroidectomy group，NT組)，行甲狀腺近全切除術(shù)（單側(cè)甲狀腺全切+對(duì)側(cè)甲狀腺切除90％）;(3)甲狀腺近全切

3、除術(shù)+阿托伐他汀鈣干預(yù)組（Near-total thyroidectomy and Atorvastatin treatment group，NT+A組），行甲狀腺近全切除+阿托伐他汀治療。手術(shù)麻醉用10％水合氯醛，劑量2mL/Kg。NT+A組術(shù)后3天內(nèi)開始給予阿托伐他汀鈣混懸液灌胃，劑量為每日5mL/Kg(即阿托伐他汀鈣7.5mg/Kg)。余各組給予蒸餾水灌胃。各組兔每3天稱重一次。NT組和NT+A組，術(shù)后22天(P2點(diǎn)后1天)給予1

4、31(I)清除殘余甲狀腺功能。
　　 2、各處理時(shí)間點(diǎn):(1)分別于P1點(diǎn)（手術(shù)前1天）、P2點(diǎn)（手術(shù)后3周、131(I)治療前1天）、P3點(diǎn)（手術(shù)后5周，131(I)治療后2周）取耳中動(dòng)脈采血5ml，3000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘取上清液，并放置-70℃冰箱保存待測(cè)。(2)分別于P2點(diǎn)、P3點(diǎn)給予各組兔0.1mCi131(I)腹腔注射，24h后行甲狀腺顯像。(3)術(shù)后22天(P2點(diǎn)后1天)給予NT組和NT+A組兔耳緣靜脈注射131

5、(I)(1.0mCi/Kg)，清除殘余甲狀腺功能。(4)于手術(shù)后36天(P3點(diǎn)后1天）處死所有試驗(yàn)兔，取升主動(dòng)脈。
　　 3、分別采用酶聯(lián)免疫(Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)法測(cè)定各組兔血清促甲狀腺激素(TSH)、游離三碘甲狀腺原氨酸(FT3)、游離甲狀腺素(FT4)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、血清內(nèi)皮

6、素-1(endothelin-1，ET-1)，采用硝酸還原酶法測(cè)定兔血清一氧化氮(NO)，以及制作兔升主動(dòng)脈病理切片觀察兔動(dòng)脈內(nèi)膜變化并利用免疫組織化學(xué)技術(shù)（Immunohistochemistry，IHC）測(cè)定兔動(dòng)脈內(nèi)皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase，eNOS)、ET-1的表達(dá)情況。
　　 4、所有統(tǒng)計(jì)結(jié)果均經(jīng)統(tǒng)計(jì)軟件SPSS13.0處理，以P＜0.05為有顯著性差異。

7、>　　 結(jié)果:
　　 1、各處理組兔試驗(yàn)期間存活良好，直到實(shí)驗(yàn)結(jié)束沒(méi)有意外死亡。
　　 2、升主動(dòng)脈形態(tài)學(xué)觀察
　　 2.1、大體標(biāo)本:肉眼觀察各組動(dòng)脈形態(tài)無(wú)明顯差異。
　　 2.2、病理學(xué)觀察:①ST組:升主動(dòng)脈內(nèi)膜均無(wú)異常形態(tài)學(xué)變化;②NT組:術(shù)后5周20例中有7例主動(dòng)脈內(nèi)膜呈脂紋樣變，內(nèi)皮下有較多吞噬脂質(zhì)的泡沫細(xì)胞;有1例出現(xiàn)纖維斑塊樣改變，內(nèi)膜增厚，其中有大量吞噬脂質(zhì)的泡沫細(xì)胞;其余12例無(wú)異常

8、形態(tài)改變;③NT+A組:術(shù)后5周20例中有3例主動(dòng)脈內(nèi)膜呈脂紋樣變，可見主動(dòng)脈內(nèi)膜脂質(zhì)條紋，內(nèi)膜輕度增厚，其中有吞噬脂質(zhì)的泡沫細(xì)胞;其余17例無(wú)異常形態(tài)改變。
　　 3、各血清學(xué)檢測(cè)指標(biāo)結(jié)果比較
　　 3.1、各處理組甲狀腺功能比較
　　 3.1.1、TSH水平:①時(shí)間因素、分組因素以及時(shí)間因素和分組的交互作用均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，（F值范圍介于80.778～750.247之間;P＜0.001）;②每個(gè)分組在3個(gè)時(shí)間點(diǎn)

9、上的兩兩比較:ST組各時(shí)間點(diǎn)TSH水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);NT組與NT+A組各時(shí)間點(diǎn)TSH水平手術(shù)后隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　 3.1.2、FT3、FT4水平:①ST組各時(shí)間點(diǎn)FT3、FT4水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);②與術(shù)前相比，術(shù)后3周時(shí)NT組和NT+A組FT3、FT4水平均明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值介于20.239和25.978;P＜0.01);③術(shù)后5周時(shí)

10、NT組NT+A組FT3、FT4均未測(cè)出。
　　 3.2、血脂水平比較
　　 3.2.1、時(shí)間、分組因素的作用以及時(shí)間和分組之間的交互作用:①TG、TC、LDL-C結(jié)果:時(shí)間因素、分組因素及時(shí)間因素和分組的交互作用均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，(F值介于3.998～23.687;P＜0.05);②HDL-C結(jié)果:時(shí)間因素、分組因素以及時(shí)間因素和分組的交互作用均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3.2.2、每個(gè)分組在3個(gè)時(shí)間點(diǎn)上的兩兩比較:①

11、ST組:各時(shí)間點(diǎn)TG、TC、HDL-C、LDL-C水平差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);②NT組:各時(shí)間點(diǎn)TG、TC、LDL-C水平隨手術(shù)時(shí)間延長(zhǎng)逐漸升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);術(shù)后5周HDL-C水平與術(shù)前相比明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);③T+A組:術(shù)后3周和術(shù)后5周TG水平均與術(shù)前明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);術(shù)后3周LDL-C水平與術(shù)前相比有明顯差異(P＜0.05)。
　　 其余

12、各項(xiàng)結(jié)果比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 3.3、血清NO、ET-1水平比較
　　 3.3.1、時(shí)間因素、分組因素及時(shí)間因素和分組的交互作用有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，(F值范圍介于5.452～133.765之間;P＜0.01)。
　　 3.3.2、每個(gè)分組在3個(gè)時(shí)間點(diǎn)上的兩兩比較:①ST組:術(shù)后3周和術(shù)后5周NO水平與術(shù)前相比明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);術(shù)后5周ET-1水平與術(shù)前和術(shù)后3周相

13、比明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。②NT組:各時(shí)間點(diǎn)NO水平手術(shù)后隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);術(shù)后3周和術(shù)后5周ET-1水平與術(shù)前相比明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。③NT+A組各時(shí)間點(diǎn)NO、ET-1水平差別均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 4、免疫組化各檢測(cè)指標(biāo)結(jié)果比較
　　 4.1、eNOS、ET-1的表達(dá)結(jié)果:鏡下陽(yáng)性表達(dá)的切片中胞漿和胞核均有著色，呈棕褐

14、色，其中胞漿著色較明顯，可成片狀。eNOS表達(dá)主要見于ST組和NT+A組動(dòng)脈切片，而NT組只有少量表達(dá)或不表達(dá);ET-1表達(dá)主要見于NT組和NT+A組，而ST組只有少量表達(dá)或不表達(dá)。
　　 4.2、eNOS、ET-1的統(tǒng)計(jì)結(jié)果
　　 4.2.1、多個(gè)獨(dú)立樣本非參數(shù)檢驗(yàn):各處理組eNOS、ET-1結(jié)果比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(H=10.198和H=13.572，P＜0.01)。
　　 4.2.2、兩個(gè)獨(dú)立樣本非參數(shù)檢

15、驗(yàn):與ST組比較，NT組eNOS表達(dá)明顯降低、ET-1表達(dá)明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=-3.087和Z=-3.722，P＜0.01)。其余各項(xiàng)結(jié)果比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 5、甲狀腺放射顯像:與ST組比較，術(shù)后3周NT組和NT+A組甲狀腺顯像明顯減低;術(shù)后5周NT組和NT+A組甲狀腺顯像不明顯或未見甲狀腺顯像，此為131(I)清甲治療后殘余甲狀腺攝碘率下降所致。
　　 結(jié)論: