組織破碎提取法機(jī)理的粉末顯微特征與有效成分含量雙指標(biāo)評(píng)價(jià)研究.pdf

1、　　目的：
　　西洋參為名貴中藥,西洋參中主要的藥理活性成分是人參皂苷、西洋參多糖等,而對(duì)此類化學(xué)成分的提取多是回流提取法和超聲提取法等,本文將組織破碎提取技術(shù)首次應(yīng)用于西洋參中人參皂苷的提取研究,確立西洋參的最佳提取工藝,組織破碎提取具有快速、安全、節(jié)能、高效、環(huán)保及熱敏性成分不受破壞的特點(diǎn),從而為西洋參的研究提供極大的便利。組織破碎提取法經(jīng)過(guò)十多年的發(fā)展,對(duì)其高效、快速的事實(shí)已基本得到學(xué)術(shù)界的認(rèn)可,但對(duì)其在非加熱的情況下能夠

2、在數(shù)秒之內(nèi)快速實(shí)現(xiàn)提取過(guò)程的機(jī)理還不十分清楚。因此,本文以西洋參為例,對(duì)其組織破碎提取過(guò)程中藥材微觀狀態(tài)(顯微特征)的變化進(jìn)行探討,并通過(guò)以 HPLC方法測(cè)定提取工藝中西洋參皂苷類成分評(píng)價(jià)其提取效率,根據(jù)該雙指標(biāo)對(duì)組織破碎提取法(STE)高效、快速的提取機(jī)理進(jìn)行客觀評(píng)價(jià),從而對(duì)組織破碎提取技術(shù)在中藥領(lǐng)域的推廣和發(fā)展做出重要推動(dòng)。由于國(guó)產(chǎn)西洋參與進(jìn)口西洋參的質(zhì)量存在一定差異,因此本文在組織破碎提取工藝的基礎(chǔ)上,建立了西洋參(國(guó)產(chǎn)、進(jìn)口)中

3、人參皂苷的 HPLC現(xiàn)代分析方法,對(duì)其不同提取工藝進(jìn)行對(duì)比研究,從而對(duì)國(guó)產(chǎn)和進(jìn)口西洋參的質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　方法：
　　1、將組織破碎提取新技術(shù)應(yīng)用于西洋參中人參皂苷的提取研究,以固液比例、提取時(shí)間和提取次數(shù)為因素,每個(gè)因素選取三個(gè)水平,按照 L9(34)正交表安排正交試驗(yàn),以西洋參中人參總皂苷為指標(biāo),運(yùn)用紫外分光光度計(jì)測(cè)定西洋參提取物中人參總皂苷的含量。
　　2、將中藥顯微鑒別實(shí)驗(yàn)用于西洋參經(jīng)組織破碎提取前后藥

4、材顯微特征的變化研究,同時(shí)以超聲提取法和回流提取法為參照,對(duì)比三種方法提取前后的粉末特征和顯微特征(淀粉粒、樹(shù)脂道、木栓細(xì)胞、導(dǎo)管、草酸鈣簇晶及視野內(nèi)的整體特征等),分別加以觀察、拍照、記錄和總結(jié)。對(duì)西洋參選用 70%丙酮、水和丙酮三種溶劑,分別進(jìn)行組織破碎提取,對(duì)比各提取溶劑提取前后及不同溶劑間的粉末特征和顯微特征,分別加以觀察、拍照、記錄和總結(jié)。
　　3、首次以組織破碎提取法用于西洋參的提取,運(yùn)用高效液相色譜儀,對(duì)進(jìn)口西洋參

5、中5種人參皂苷含量進(jìn)行同步測(cè)定和進(jìn)口西洋參中 3種人參皂苷進(jìn)行定性分析；對(duì)國(guó)產(chǎn)西洋參中人參皂苷Rg1含量進(jìn)行測(cè)定并進(jìn)行相關(guān)方法學(xué)考察。
　　結(jié)果：
　　通過(guò)極差分析得到提取次數(shù)為主要影響因素,通過(guò)方差分析得到西洋參組織破碎提取最佳工藝為：以 70%丙酮為溶劑,提取固液比為：1：40、提取時(shí)間為：3min、提取次數(shù)為：3 次,同時(shí),將此最佳工藝分別與回流提取法、超聲提取法進(jìn)行對(duì)比研究,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：組織破碎提取法的時(shí)間短、

6、效率高,大大節(jié)省了時(shí)間和能源。
　　通過(guò)對(duì)比提取前后藥材顯微特征發(fā)現(xiàn)：西洋參提取前后的顯微特征均發(fā)生不同程度的變化,從而從微觀角度佐證了組織破碎提取技術(shù)對(duì)中藥西洋參提取時(shí)的工作機(jī)理。選用水和丙酮為提取溶劑時(shí),提取前后西洋參粉末的特征變化不同于70%丙酮。
　　試驗(yàn)確定的 HPLC 條件為：采用梯度洗脫,使用 InertexC18色譜柱,乙腈-水為流動(dòng)相,流速為 1mL.min-1,柱溫為室溫,紫外檢測(cè)器,在 203nm

7、處測(cè)定西洋參供試品。在選定的色譜條件下每種成分在各自的濃度范圍內(nèi)均具有較好的線性相關(guān)性,國(guó)產(chǎn)西洋參中人參皂苷Rg1和進(jìn)口西洋參中5種人參皂苷均取得了較好的加樣回收率,同時(shí),與超聲提取法進(jìn)行比較研究,超聲提取法在提取效率和人參皂苷提取收率上均不及組織破碎提取法,從而為西洋參的提取工藝研究開(kāi)辟了新的途徑。
　　結(jié)論：
　　1、通過(guò)本文的研究,首次確立了西洋參組織破碎提取的最佳工藝：即 70%丙酮為溶劑,提取固液比為1：40,

8、提取時(shí)間3min,提取次數(shù)3次。此工藝條件下,西洋參總皂苷成分的含量最高,且該提取工藝與其它工藝相比時(shí)間短、效率高、節(jié)省溶劑和能源,為西洋參的后續(xù)相關(guān)研究提供一種簡(jiǎn)便的提取工藝。
　　2、以西洋參為例,首次闡明了組織破碎提取法高效快速的提取機(jī)理,在閃式提取器快速攪拌、超強(qiáng)振動(dòng)、超動(dòng)分子滲濾技術(shù)作用下,西洋參在短時(shí)間內(nèi)由藥材飲片變?yōu)榧?xì)粉,藥材的木栓細(xì)胞、導(dǎo)管及草酸鈣簇晶等顯微特征發(fā)生不同程度的變化,且不同的提取溶劑作用下,顯微特征