核心蛋白聚糖及相關(guān)炎癥因子在血管痙攣患者中濃度的動態(tài)變化及臨床意義.pdf

1、[背景及目的]:腦血管痙攣(Cerebral Vasospasm CVS)是蛛網(wǎng)膜下腔出血(subarachnoidhemorrhage SAH)最嚴重的并發(fā)癥之一，發(fā)生率高達30％～60％。常引起嚴重局部腦組織缺血或遲發(fā)性缺血性腦損害，是SAH病人致死和致殘的重要原因，發(fā)病機制目前尚未明確。近年來研究認為:炎癥反應在遲發(fā)性腦血管痙攣的發(fā)病機制中起重要作用，可能的機制包括全身炎癥反應，白細胞與內(nèi)皮細胞相互作用，各種細胞因子、黏附分子和信

2、號轉(zhuǎn)導通路的參與及某些炎癥相關(guān)蛋白基因型改變等。細胞因子是由免疫系統(tǒng)細胞及其他類型細胞主動分泌的一類小分子量的可溶性蛋白質(zhì).具有促進細胞間相互作用等多種生物學活性。研究表明在血管痙攣的過程中細胞因子間相互調(diào)控及其與炎性細胞的級聯(lián)放大作用是血管痙攣的重要因素。大量研究報道細胞外基質(zhì)中的多個分子參與血腦屏障的破壞與重建、神經(jīng)元的壞死與修復等過程，影響疾病的發(fā)展與預后，其活性的改變與腦微血管通透性、血腦屏障崩潰、炎性細胞侵入和腦水腫明顯相關(guān)。

3、核心蛋白聚糖(Decorin，DCN)是一種富含亮氨酸小分子蛋白聚糖，是細胞外基質(zhì)(ExtracellularMatrix，ECM)的重要介質(zhì)，具有多種生物學活性。DCN在調(diào)節(jié)細胞黏附、遷徙、增殖，膠原纖維形成及對轉(zhuǎn)化生長因子(Transforming growth factor-β1 TGF-β1)活性調(diào)節(jié)中起重要作用。近來發(fā)現(xiàn)decorin高表達可以使TGF-1和白細胞介素(IL-1)的水平降低，相反使IL-4和腫瘤壞死因子(TNF

4、-a)水平升高，說明DCN在細胞因子產(chǎn)生的調(diào)節(jié)中起著重要作用。我們在前期研究中通過大鼠全基因組芯片研究發(fā)現(xiàn)DCN參與腦組織細胞外基質(zhì)的重構(gòu)，調(diào)節(jié)腦微血管內(nèi)皮細胞的凋亡與再生，可能也直接或者間接參與了血管痙攣及遲發(fā)性腦損害的病理生理過程。最近對于DCN的基礎研究也同時表明，DCN與細胞外基質(zhì)中多種活性介質(zhì)有直接作用。研究表明在急性缺血性卒中患者血漿中DCN水平顯著低于對照組，且在發(fā)病后2周內(nèi)呈動態(tài)降低，其水平變化與MMP-2濃度呈正相關(guān)，

5、且在不同的臨床亞型中濃度變化有差異。由上述研究我們推測DCN協(xié)同其它細胞因子可能直接或者間接參與了蛛網(wǎng)膜下腔出血后炎癥反應過程，并最終導致血管痙攣的發(fā)生及遲發(fā)性腦損害的病理生理過程，其可能在調(diào)節(jié)炎癥因子間的相互作用及血管痙攣后缺血處的細胞外基質(zhì)重建、神經(jīng)元修復等方面發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。本研究擬通過病例對照研究，觀察DCN及細胞因子(TGF-β1、TNF-a、MMP-2、MMP-9)在急性SAH患者血漿及腦脊液中的濃度變化及其與腦血管痙攣及預后

6、的相關(guān)性，明確其在血管痙攣的診斷及作用，為SAH后血管痙攣疾病的防治及預后康復提供新的思路。
　　 [方法]:采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定急性SAH血管痙攣組及對照組（急性SAH非痙攣組）在發(fā)病后不同時間點（＜3天、4-7天、8-14天）動態(tài)觀察超敏CRP、DCN及炎癥細胞因子(TGF-b1、TNF-a、MMP-2、MMP-9)的動態(tài)變化趨勢，分析超敏CRP、DCN及細胞因子（TGF-β1、TNF-a、MMP-2、MMP

7、-9）在血管痙攣及非血管痙攣組間有無差異表達，同時我們繼續(xù)隨訪上述患者3月后的預后(mRS評分)情況。進一步明確上述指標在不同預后的患者中有無差異表達情況。
　　 [結(jié)果]:
　　 1、血清中Hs-CRP(蛛血后1-3天 P=0.041)，DCN(蛛血后8-12天 P=0.003)，TGF-β(蛛血后8-12天 P=0.049)以及TNF-a（蛛血后4-7天 P=0.01）與血管痙攣相關(guān)。除TGF-β外，血清中CRP,

8、DCN，TNF-a，MMP-2，MMP-9在痙攣組中的濃度均值均較非痙攣組中高，但部分無明顯統(tǒng)計學差異。
　　 2、腦脊液中Hs-CRP(蛛血后1-3天 P=0.011，蛛血后4-7天 P=0.001),DCN(蛛血后8-12天 P=0.037)，TGF-β（蛛血后1-3天 P=0.0482，蛛血后4-7天 P=0，003）與血管痙攣相關(guān)。除TGF-β在SAH后4-7天標本外，腦脊液中CRP, DCN，TNF-a，MMP-2，M

9、MP-9在痙攣組中的濃度均值均較非痙攣組中高，但部分無明顯統(tǒng)計學差異。
　　 3、在預后好(Mrs＜2)與壞(Mrs＞2)分組之間，血清中DCN(蛛血后1-3天 P=0.001)、MMP-2(蛛血后4-8天 P=0.006，蛛血后8-12天 P=0.006)，以及TNF=a（蛛血后4-7天 P=0.001蛛血后8-12天 P=0.05）與SAH的預后相關(guān)。
　　 4、在預后好(Mrs＜2)與壞(Mrs＞2)分組之間，腦脊

10、液中Hs-CRP(蛛血后4-7天 P=0.011)、DCN(蛛血后1-3天 P=0.043，蛛血后4-7天 P=0.04)、MMP-9(蛛血后1-3天 P=0.011)與SAH的預后相關(guān)。
　　 5、Logistic回歸分析提示腦脊液中1-3天MMP9(OR=1.135;95％CI:1.048-1.229 p=0.002)、1-3天血清中MMP2(OR=1.142;95％CI:1.002-1.301;p＜=0.046)和SIRS

11、(OR=0.040;95％CI:0.005-0.305;p=0.002)為急性SAH后CVS發(fā)生的危險因素。Logistic回歸分析提示第8-12天腦脊液中DCN(OR=1.002;95％CI:1.000-1.003 p=0.024)、CRP(OR=1.013;95％CI:1.001-1.026 p=0.034)含量及fisher分級(OR=8.163;95％CI:1.537-43.353 p=0.014)可作為急性蛛網(wǎng)膜下腔出血預后不

12、良(Mrs＞2)的危險因素。
　　 6、受試者工作特征曲線(ROC)分析顯示第8-12天腦脊液中DCN(曲線下面積0.783P=0.001)及Hs-CRP(曲線下面積0.790 P=0，001)水平用于急性蛛網(wǎng)膜下腔出血預后的好壞判定有顯著意義。受試者工作特征曲線(ROC)分析顯示第1-3天腦脊液中MMP-9（曲線下面積0.877 P=0.002）及血清中MMP-2(曲線下面積0.717 P=0，0146)水平用于急性蛛網(wǎng)膜下腔

13、出血CVS的判定有顯著意義。選取MMP-928ng/ml時作為診斷SAH后血管痙攣界值點時，敏感度為86.4％，特異度為81.1％。
　　 7、相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)3個時間點血清中DCN與HS-CRP(R＞0.342 P＜0.008)呈顯著正相關(guān);腦脊液中3個時間點TGF-β與CRP(R＞0.351 P＜0.006)及MMP-9(R＞0.363 P＜0.005)均呈顯著正相關(guān)。
　　 [結(jié)論]:本研究通過病例對照發(fā)現(xiàn)急性SAH

14、患者血漿及腦脊液中DCN及其他炎癥細胞因子CVS組較NO-CVS組部分指標差異表達，其中血及腦脊液中DCN及TGF-β在CVS及NO-CVS組中存明顯表達差異。在預后較差組較預后良好組之間DCN在血及腦脊液找那個也有所差異表達。這提示DCN及其它細胞炎癥因子直接或者間接的參與了血管痙攣及遲發(fā)性的腦損害等病理生理過程，并且炎癥因子間可能存在著相互作用?？赡茉谡{(diào)節(jié)炎性細胞間相互作用及出血后遲發(fā)性腦損害的細胞外基質(zhì)重建、神經(jīng)元修復等方面發(fā)揮調(diào)