中國健康人群凝血因子XII正常值水平及其基因?qū)W研究.pdf

1、目的：凝血因子Ⅻ(FⅫ)，曾被稱為Hageman因子，是內(nèi)源性凝血途徑接觸激活系統(tǒng)系統(tǒng)的重要組成之一。遺傳性FⅫ缺乏是一種罕見凝血因子缺陷癥，通常為常染色體隱性遺傳，部分呈現(xiàn)顯性遺傳。與其他凝血因子不同，即使是嚴重的遺傳性FⅫ缺乏者，臨床上并無明顯出血表現(xiàn)，而僅表現(xiàn)為APTT延長。因此，目前該病在人群中的發(fā)病率并不明確。迄今為止，中國人群大規(guī)模FⅫ活性水平研究數(shù)據(jù)較少，臨床中FⅫ活性減低標準也僅參照國外檢測儀器或試劑提供的臨界值，不能真

2、實反映中國人群FⅫ水平。研究表明FⅫ基因中存在46C/T多態(tài)性位點，且該多態(tài)性位點與FⅫ活性水平相關(guān)。該位點在日本人群中的等位基因頻率為0.27/0.73，而在高加索人中為0.8/0.2。純合子46T/T FⅫ蛋白表達量常低于雜合子46C/T FⅫ蛋白表達量，高加索人群的FⅫ活性高于日本人群考慮與46C/T頻率低有關(guān)。本文通過大樣本橫斷面研究探討中國人群FⅫ活性正常值范圍，并對FⅫ活性減低者進行基因檢測，有助于明確中國人群FⅫ活性水平，

3、并在DNA水平認識疾病，探討FⅫ缺乏癥的分子發(fā)病機制。
　　研究對象和方法1受試者招募2014年4月-8月北京協(xié)和醫(yī)院健康查體人群，罹患癌癥等、肝腎損害、口服避孕藥物或激素替代治療者、有靜脈和/或動脈血栓性疾病史人群將排除入組，所有受試者均需簽署書面知情同意書。該研究經(jīng)北京協(xié)和醫(yī)學院北京協(xié)和醫(yī)院倫理委員會審批，編號為S-686。
　　方法：
　　1.資料采集受試者入組后，收集其人口學特征及臨床特征資料，涵蓋性別、年齡、

4、用藥史、血栓疾病的個人史和家族史等。
　　2.標本采集按照如下方式收集靜脈血:
　　收集所有受試者空腹枸櫞酸鈉抗凝血2.7ml，在室溫下2000g離心20分鐘，分離乏血小板血漿于-80℃冷藏，用于APTT、FⅫ活性分析和LA檢測。剩余血細胞采用DNA提取試劑盒進行DNA收集。溶血及脂血標本棄用。
　　3.FⅫ活性與抗原測定FⅫ活性檢測采用法國STAGO公司試劑盒，于STA-R全自動凝血酶儀（STAGO公司產(chǎn)品）測定，所

5、有操作步驟均嚴格按照試劑說明書進行。采用ELISA試劑盒(ab108835，Abcam(@)公司)進行FⅫ抗原檢測。
　　4.基因檢測在FⅫ活性降低者進行FⅫ基因檢測。根據(jù)FⅫ基因序列(GenBankAF538691)，應用primer5軟件共設(shè)計7對引物以覆蓋FⅫ基因的所有外顯子區(qū)域及其側(cè)翼序列。在PCR擴增儀上進行擴增，產(chǎn)物回收純化自備測序模板，測序結(jié)果與美國NCBI基因庫所公布的FⅫ基因序列(GenBank AF538691

6、)進行對比。
　　結(jié)果：
　　1.共納入549例（男264例，女285例）受試者，年齡范圍16-79歲，中位年齡43歲。
　　2.中國人群FⅫ活性正常值范圍是47％-160.25％，F(xiàn)Ⅻ活性的平均值是91.02±29.53％，與年齡及性別無相關(guān)性。
　　3.46T/T基因型受試者FⅫ活性及抗原水平均明顯低于46C/T或46C/C基因型受試者。中國健康人群中46C/T等位基因頻率為0.31/0.69。
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