卵巢癌組織中KLK11基因的表達(dá)意義.pdf

1、卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)最常見的三大惡性腫瘤之一，死亡率占女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的首位，至今發(fā)病機(jī)制尚未闡明，缺乏有效的早期診斷和治療方法。人激肽釋放酶Kallikrein(KLK)基因家族包括KLK1～KLK15基因，定位于19q13～14染色體上，編碼相應(yīng)的人激肽釋放酶HK1～HK15，為一組絲氨酸蛋白酶，廣泛存在于各種組織和體液中，參與多種生理和病理過程。研究發(fā)現(xiàn)70％的卵巢癌患者血清中HK11水平是升高的，提示HK11可能是卵巢癌潛在

2、的生化標(biāo)記物，但KLK11的表達(dá)與臨床分期、分化程度、及組織學(xué)分型的關(guān)系尚未見報道。 本研究采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)和免疫組化技術(shù)檢測卵巢癌KLK 11 mRNA及蛋白的表達(dá)，并結(jié)合其臨床病理特征進(jìn)行分析，旨在探討KLK 11基因的表達(dá)與卵巢癌發(fā)病的關(guān)系，以期為臨床卵巢癌的診治提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，并初步探討其發(fā)生的分子機(jī)制。 一、方法 1．RT-PCR：取48例卵巢癌新鮮手術(shù)標(biāo)本，提取總RNA逆轉(zhuǎn)錄成

3、cDNA。通過PCR擴(kuò)增KLK 11基因，PCR反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)電泳檢測。 2．免疫組織化學(xué)染色：采用SP法，按常規(guī)方法操作。一抗為鼠抗人KLK11單克隆抗體，DAB顯色。 3．圖像分析：采用Leica RX 250型圖像分析系統(tǒng)，對免疫組化陽性染色進(jìn)行定量分析。測量視野中陽性染色的相對面積(即陽性細(xì)胞面積/鏡下細(xì)胞及問質(zhì)總面積×100％)和陽性染色積分灰度值。 4．統(tǒng)計學(xué)分析：應(yīng)用Spss11.0軟件對不同臨床病理分

4、級及組織學(xué)類型的卵巢癌樣本數(shù)據(jù)采用x<'2>檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)和方差分析等方法進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。 二、結(jié)果 1．RT-PCR．KLK11基因在卵巢癌中高表達(dá)，KLK 11 mRNA表達(dá)與卵巢癌臨床病理特征關(guān)系密切。隨臨床分期增加，KLK 11基因的mRNA表達(dá)水平增高，晚期卵巢癌(Ⅲ/Ⅳ期)KLK 11基因mRNA表達(dá)水平明顯高于早期卵巢癌(Ⅰ/Ⅱ期)；中低分化卵巢癌KLK 11mRNA表達(dá)明顯高于高分化卵巢癌；KLK 11 m

5、RNA表達(dá)水平與卵巢癌組織學(xué)分型無關(guān)。 2．免疫組化染色： HK11蛋白陽性染色定位于細(xì)胞質(zhì)中，在晚期卵巢癌中的HK11陽性表達(dá)程度高于早期的卵巢癌；分化差卵巢癌中HK11陽性表達(dá)程度高于分化好的卵巢癌；不同的組織學(xué)分型間的表達(dá)程度無明顯差異。 3．圖像分析結(jié)果晚期卵巢癌和分化差卵巢癌中陽性染色的相對面積和積分灰度值均高于早期卵巢癌和分化好的卵巢癌，其差異有統(tǒng)計意義。 三、結(jié)論 1．KLK11在卵巢癌中高