胰島素樣生長因子2(IGF2)基因的印記丟失對生精功能的影響.pdf

1、目的：
　　為了評估IGF2印記丟失對生精功能的影響。
　　方法：
　　將研究對象的睪丸活檢組織、少-弱-畸精癥的血液組織及小鼠的睪丸組織的DNA和RNA經(jīng)過PCR擴(kuò)增和ApaⅠ酶切來決定IGF2的印記狀態(tài)。為了驗(yàn)證IGF2的印記丟失對生精功能的影響，我們通過睪丸輸出小管顯微注射技術(shù)構(gòu)建了小鼠模型，按照干預(yù)的手段分為兩種：抗體組和空白對照組，再按照干預(yù)的時間將其處死，取其睪丸組織。最后通過免疫組化和HE染色檢測睪丸中I

2、GF2的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　我們選取的60例無精子癥患者的睪丸組織中有25例患者的IGF2基因的第9外顯子存在ApaⅠ的多態(tài)性酶切位點(diǎn)，這些患者中有13例（52％）存在IGF2的LOI。而選取的對照組中10例經(jīng)過去勢治療的前列腺癌患者的睪丸組織有5例有意義，其中有3例存在印記丟失，兩組間沒有明顯差異（P=0.3085）。我們選取的24例非梗阻性無精癥的睪丸活檢組織中有18例（75%）的睪丸組織存在IGF2的高表達(dá)，相

3、反，15例梗阻性無精子癥患者中有12例（80%）存在IGF2的低表達(dá)。兩組間存在明顯的差異（P=0.00098）。為了進(jìn)一步研究男性精液參數(shù)與IGF2印記狀態(tài)的關(guān)系，我們選取了74例少-弱-畸精癥患者的新鮮外周血為實(shí)驗(yàn)組，10例生育能力正常的男性新鮮外周血為對照組。通過ApaⅠ限制性酶切法，我們發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組中有34例患者的第9外顯子存在ApaⅠ的多態(tài)性酶切位點(diǎn)，其中有28例（82.3%）存在IGF2的LOI。而對照組則全部維持正常的印記狀

4、態(tài)。在構(gòu)建的小鼠模型中，與空白對照組相比，小鼠睪丸內(nèi)注射抗體可以引起IGF2的表達(dá)下降，同時睪丸內(nèi)的精子數(shù)也減少。
　　結(jié)論：
　　我們發(fā)現(xiàn)在無精子癥患者的睪丸組織和少-弱-畸精癥的血液組織中IGF2基因發(fā)生了高概率的印記丟失。這個遺傳學(xué)改變作為一個生物學(xué)指標(biāo)可能有助于男性精液差或男性不育的診斷。而小鼠睪丸內(nèi)注射抗體可以引起IGF2的表達(dá)下降，同時睪丸內(nèi)的精子數(shù)也減少。這就意味著，維持IGF2基因生理性的表達(dá)才能維持正常的生