百合知母湯抗抑郁作用的理論與實驗研究.pdf

1、百合病見于張仲景的《金匱要略》，與情志失調(diào)關(guān)系密切。其臨床表現(xiàn)與抑郁癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)有較明顯的相似之處。百合知母湯為治療百合病的方藥之一，由百合和知母兩味藥組成。本課題系統(tǒng)研究了百合知母湯的化學(xué)成分，鑒定22個化合物，其中1個為新化合物，其它化合物均為首次從百合知母湯中分離得到。針對其富含的甾體皂營，確定了總皂苷的提取和純化工藝，并建立了皂苷的含量測定方法。采用小鼠尾懸掛、大鼠強(qiáng)迫游泳和慢性應(yīng)激模型，對百合知母湯和總皂苷的抗抑郁作用及作用機(jī)

2、制進(jìn)行了研究，結(jié)果提示，百合知母總皂苷是百合知母湯抗抑郁作用的活性成分之一；百合知母總皂苷抗抑郁作用很有可能與其增加腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)、逆轉(zhuǎn)HPA軸功能亢進(jìn)等有關(guān)。本課題闡明了經(jīng)典方百合知母湯抗抑郁的物質(zhì)基礎(chǔ)，同時對其抗抑郁有效部位總皂苷的作用機(jī)制進(jìn)行了初步探討，為抗抑郁藥物的研究奠定了科學(xué)基礎(chǔ)。 神經(jīng)內(nèi)分泌抑郁癥是一種情感性精神障礙，臨床上以情緒低落、思維遲緩和精神運動性抑制為特征，其它癥狀包括喪失自尊、不恰當(dāng)?shù)膬?nèi)疚感、死亡和自殺念

3、頭、注意力集中程度降低以及睡眠和食欲減退，還可能伴有各種軀體癥狀。 抑郁癥是一種最普通的精神疾病，在西方工業(yè)發(fā)達(dá)國家終身抑郁癥的發(fā)病率在6％～8％之間，隨著人口的逐步老齡化，抑郁癥在60歲以上人群中的發(fā)病率將高達(dá)20％～50％。根據(jù)世界衛(wèi)生組織發(fā)表的《2001年世界衛(wèi)生報告》，抑郁癥目前已成為世界第四大疾患，到2020年抑郁癥可能成為僅次于心臟病的第二大疾病，抑郁癥正成為一個嚴(yán)重的全球問題。 抗抑郁藥物的研發(fā)在國外很受重

4、視，據(jù)估計目前全世界有 100 家企業(yè)正在進(jìn)行有關(guān)治療抑郁癥藥物的研制工作。抑郁癥發(fā)病機(jī)制甚為復(fù)雜，誘發(fā)原因較多，針對某單一環(huán)節(jié)的藥物往往難以取得滿意療效。合成抗抑郁藥大多存在抗抑郁譜窄、副作用大、藥價高和易復(fù)發(fā)等缺陷。因此，國內(nèi)外在抗抑郁藥的研制與開發(fā)方面越來越注重傳統(tǒng)藥(特別是有兩千多年歷史的中草藥)。 百合病最早見于張仲景的《金匱要略》，與情志失調(diào)關(guān)系密切?！督饏T．百合狐惑陰陽毒病證治》篇將“百合病”描述為：“意欲食復(fù)不能

5、食，常默然，欲臥不能臥，欲行不能行，飲食或有美時，或有不用聞食臭時，如寒無寒，如熱無熱，口苦，小便赤，諸藥不能治，得藥則劇吐利，如有神靈者，身形如和，其脈微數(shù)?！睆陌俸喜〉呐R床表現(xiàn)看，與抑郁癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)有較明顯的相似之處，如：喜悲傷欲哭、常默默符合抑郁癥的特異癥狀(必備癥狀)—情緒低落：欲臥不能臥與其基本癥狀之一的多數(shù)抑郁患者以睡眠障礙為特征相接近；意欲食復(fù)不能食、飲食或有美時、或有不用聞食臭時、如寒無寒、如熱無熱，與抑郁患者的軀體癥狀

6、也有相似之處。從百合病因來看，“傷寒大病之后，余熱未解，百脈未和；或平素多思不斷，情志不遂，或偶觸驚疑，卒臨景遇，因而形神俱病”。余熱未盡或情志不遂，郁而化火耗傷心肺的陰液，形成心肺陰虛內(nèi)熱。心主血脈，肺主氣而司治節(jié)，朝百脈，故心肺功能正常，則氣血調(diào)和而百脈皆得其養(yǎng)，若心肺陰虛成病，則氣血失調(diào)百脈受累，故證候百出。氣血充盛，則思考敏捷，精神充沛，若陰血不足則神明失養(yǎng)，故出現(xiàn)種種精神恍惚不定的精神和軀體癥狀。所以現(xiàn)代不少醫(yī)家都將中醫(yī)的百合

7、病歸屬于抑郁癥的范疇。百合知母湯為治療百合病的方藥之一，由百合和知母兩味藥組成。百合寧心安神，潤肺止咳；知母清熱瀉火，滋陰潤燥。百合甘寒清潤而不膩，知母苦寒降火而不燥。百合偏于補(bǔ)，知母偏于瀉。二藥伍用，一潤一清，一補(bǔ)一瀉，共奏潤肺清熱，寧心安神之效。主治陰虛或溫?zé)岵『笥酂崮┣澹灾骂^昏、心煩不安、失眠等癥以及情志不遂，以致精神恍惚、不能自制等癥。 本課題系統(tǒng)研究了百合知母湯的化學(xué)成分，利用硅膠、大孔樹脂、sphadexLH-20

8、、反相硅膠柱層析、中壓柱層析及HPLC等分離手段，共分得27個化合物單體，應(yīng)用理化常數(shù)測定和光譜(UV，IR，MS，<'1>H-NMR，<'13>C-NMR, 2D-NMR)分析技術(shù)鑒定了其中的 22 個。在闡明百合知母湯物質(zhì)基礎(chǔ)后，針對其中富含的甾體皂苷類成分，進(jìn)行了總皂苷的提取和純化工藝研究，結(jié)果表明，百合知母總皂苷的提取工藝為：百合和知母(2：1)藥材粉碎，過14目篩，用30％乙醇作提取溶媒滲漉提取，先以3倍量溶媒浸潤6h，再收集

9、24倍量滲漉液，滲漉速度為1.2BV/h。百合知母總皂苷的具體純化工藝為：百合和知母(2：1)藥材30％乙醇滲漉液減壓濃縮至濃度為0.75：1(藥材重量：溶液體積)，冷卻、過濾，濾液即為上柱樣品液。將上柱樣品液按0.8BV上樣量通入裝有AB-8型樹脂的色譜柱中，依次用12BV的蒸餾水、12BV的20％乙醇、10BV的70％乙醇、8BV的95％乙醇梯度洗脫，流速為2.5BV/h。70％乙醇洗脫液減壓濃縮，干燥并粉碎得淡黃色粉末可得百合知母

10、總皂苷成品。 對于新工藝得到的百合知母總皂苷，采用分光光度法測定百合知母總皂苷的含量，三批次百合知母總皂苷的平均含量為 74.37％；采用 HPLC-ELSD 法測定百合知母總皂苷中知母皂苷B2和纖細(xì)薯蕷皂苷的含量，其中知母皂苷B2的含量為35％左右，纖細(xì)薯蕷皂苷的含量為18％左右。兩者含量之和≥53％。 在百合知母湯抗抑郁作用方面，采用抗抑郁藥的高選擇性動物模型小鼠尾懸掛和大鼠強(qiáng)迫游泳實驗?zāi)Ｐ?，對其抗抑郁作用進(jìn)行了初步

11、研究。結(jié)果表明，百合知母湯可以對抗小鼠、大鼠的失望行為，使小鼠尾懸掛的失望時間和大鼠強(qiáng)迫游泳的不動時間顯著縮短，具有抗抑郁效應(yīng)，且呈一定的劑量依賴關(guān)系。 在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步對百合知母總皂苷的抗抑郁作用進(jìn)行了研究，結(jié)果表明，百合知母總皂苷亦可以對抗小鼠、大鼠的失望行為，使小鼠尾懸掛的失望時間和大鼠強(qiáng)迫游泳的不動時間顯著縮短，具有抗抑郁效應(yīng)，且呈一定的劑量依賴關(guān)系；在慢性應(yīng)激抑郁模型實驗中，百合知母總皂苷組大鼠在水平運動、垂直運動、

12、清潔動作次數(shù)糖水消耗等方面得到了改善。結(jié)果提示，百合知母總皂苷是百合知母湯抗抑郁作用的活性成分之一。 從腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)和神經(jīng)內(nèi)分泌2個方面探討百合知母總皂苷抗抑郁的作用機(jī)理，結(jié)果表明，百合知母總皂苷能顯著增加大鼠腦內(nèi)NE、5-HT和DA的含量，并使慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠血漿CORT和ACTH含量恢復(fù)正常。表明百合知母總皂苷抗抑郁作用很有可能與其增加腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)、逆轉(zhuǎn)HPA軸功能亢進(jìn)等有關(guān)。 此外，百合知母湯的毒理學(xué)研究結(jié)果顯

13、示，灌胃給予百合知母湯對小鼠的29394.4 mg/kg 體重，相當(dāng)于推薦人臨床劑量108mg浸膏/kg體重的272.2倍；大鼠對百合知母湯的MTD為15238mg/kg，相當(dāng)于推薦人臨床劑量108mg浸膏/kg體重的141.1倍；給SD大鼠連續(xù)灌胃給予百合知母湯3g生藥/kg/d、9g生藥/kg/d和30g生藥/kg/d 6個月，各給藥組大鼠飲食、活動正常，無明顯毒性反應(yīng)：食量、體重與空白對照組大鼠比，無顯著差異；百合知母湯連續(xù)灌胃對