化瘀消瘤方含藥血清對人肺癌A549細胞Fas-Fasl表達的影響.pdf

1、目的：本實驗運用血清藥理學的方法，通過觀察化瘀消瘤方含藥血清對人肺癌A549細胞Fas和FasL表達的影響，探討化瘀消瘤方含藥血清對人肺癌細胞凋亡的誘導作用及其機制，為臨床應用化瘀消瘤方治療肺癌提供理論依據。 方法： (1)健康家兔20只，雄性，隨機分5組，每組4只。用不同劑量的化瘀消瘤方水煎劑給家兔灌胃，通過頸動脈采血，分離血清，制備高、中、低劑量化瘀消瘤方含藥血清及全反式維甲酸血清和生理鹽水對照血清。 (2)

2、以高、中、低劑量化瘀消瘤方含藥血清，全反式維甲酸血清和對照血清分別作用于人肺腺癌細胞系A549細胞。 (3)上述各組合藥血清分別作用24h、48h后，應用倒置相差顯微鏡分別對細胞生長和凋亡進行動態(tài)形態(tài)學觀察；HE染色光鏡觀察用藥前后A549細胞形態(tài)變化；免疫組化SP法檢測A549細胞Fas和FasL的表達。 結果： (1)倒置顯微鏡觀察，A549細胞排布緊密，貼壁生長，細胞為多邊形，細胞透亮、飽滿；細胞密集，相鄰

3、細胞有細胞重疊現(xiàn)象；經低劑量化瘀消瘤方含藥血清作用后，A549細胞數目減少，但形態(tài)學改變不明顯。經中、高劑量化瘀消瘤方含藥血清及RA組處理24h后，則出現(xiàn)一定程度的形態(tài)學改變，表現(xiàn)為細胞稀疏，胞突回縮，細胞體積變小、變圓形；重疊生長現(xiàn)象減少，細胞數目減少；胞漿透亮度下降，顆粒感增強；部分細胞脫落呈懸浮狀，并見細胞碎片，上述變化在48h后更明顯。 (2)HE染色光鏡觀察，可見經含化瘀消瘤方的兔血清作用后，A549細胞體積變小、變圓

4、形，細胞稀疏，細胞間隙增大；胞膜皺縮，細胞核大小不等，形態(tài)不規(guī)則，胞核內染色質密度增高，呈半月形或環(huán)形凝集在核膜周邊，顯示典型的凋亡細胞形態(tài)，其中以高劑量含藥血清組最多。不含藥血清組細胞核完整，未見凋亡形態(tài)細胞。 (3)免疫組織化學染色顯示，化瘀消瘤方含藥血清可上調A549細胞Fas的表達(P<0.05)，下調A549細胞FasL的表達(P<0.05)?；鱿龇胶幯遄饔?4h、48h后，高劑量化瘀消瘤方含藥血清組和ATRA

5、組與對照血清組之間Fas的表達均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，且Fas的表達均隨含藥血清劑量的增加和作用時間的延長而增強。化瘀消瘤方含藥血清作用24h、48h后，中、高劑量化瘀消瘤方含藥血清和ATRA組與對照血清組之間FasL的表達均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，且FasL的表達均隨含藥血清劑量的增加和作用時間的延長而減弱。 結論： 本實驗表明化瘀消瘤方含藥血清可以上調肺癌A549細胞Fas的表達和下調其FasL的表達，