miR-124通過靶向SPHK1抑制胃癌生長侵襲及臨床意義.pdf

1、目的：探討miR-124（Homo sapiens miR-124）在胃癌MGC-803細(xì)胞中生物學(xué)功能，以及在胃癌組織中的表達(dá)情況及臨床意義。
　　方法：選取胃癌組織標(biāo)本176例，癌旁組織作為正常對照，運(yùn)用原位雜交檢測胃癌組織及癌旁組織中miR-124的表達(dá)水平；采用MTT、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測miR-124對人胃癌MGC-803細(xì)胞的生長、侵襲轉(zhuǎn)移能力；運(yùn)用Western blot、熒光素報告載體系統(tǒng)檢

2、測miR-124直接調(diào)控的靶基因。
　　結(jié)果：原位雜交結(jié)果顯示，在176例胃癌組織中miR-124陽性表達(dá)率為18.18％顯著低于癌旁對照組86.36%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；miR-124的表達(dá)隨著胃癌臨床分期演進(jìn)和浸潤深度的增加而下調(diào)，各組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；miR-124的表達(dá)與胃癌的分化程度相關(guān)，分化越差其表達(dá)越低，各組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；且有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的miR-124的

3、表達(dá)顯著低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。MTT結(jié)果顯示，在轉(zhuǎn)染miR-124 mimics12 h、24h、48h后 OD值為(0.152±0.003)、(0.216±0.001)、(0.242±0.020)分別與對照組(0.316±0.010)、(0.429±0.002)、(0.517±0.007)比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），且具有時間依賴性；細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)顯示，轉(zhuǎn)染miR-124mimics12h、

4、24h后傷口愈合率分別為(0.243±0.005)、(0.341±0.026)與各自對照組(0.399±0.015)、(0.745±0.013)比能明顯減緩MGC-803細(xì)胞劃痕傷口的愈合，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)顯示，轉(zhuǎn)染miR-124mimics24h后穿過基底膜的細(xì)胞數(shù)為(43±5)與對照組(108±17)比能明顯減緩 MGC-803細(xì)胞侵襲能力，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；熒光素報告載體

5、系統(tǒng)證實(shí) SPHK1（鞘氨醇激酶，Sphingosine kinase1, SPHK1）是miR-124直接調(diào)控的靶基因；Western blot結(jié)果顯示，miR-124可抑制SPHK1、MMP-2和MMP-9蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)論：
　　1.miR-124在胃癌中表達(dá)下調(diào)，且其表達(dá)與胃癌的臨床進(jìn)展、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。
　　2.SPHK1是miR-124直接調(diào)控的靶基因。
　　3.miR-124可通過下調(diào)