乳鼠竇房結(jié)細(xì)胞原代培養(yǎng)方法的改進(jìn)及自律細(xì)胞HCN4基因通道的研究.pdf

1、目的：對乳鼠竇房結(jié)細(xì)胞原代培養(yǎng)的方法進(jìn)行改進(jìn)，建立較以往更為優(yōu)化、規(guī)范的培養(yǎng)方法，并對竇房結(jié)自律細(xì)胞生物學(xué)特性進(jìn)行研究，觀察超極化激活門控陽離子通道基因(HCN4)在心臟細(xì)胞上的表達(dá)特點(diǎn)，為深入了解竇房結(jié)起搏位點(diǎn)的電生理特性提供進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：取新生SD乳鼠的竇房結(jié)組織，參照傳統(tǒng)乳鼠竇房結(jié)原代培養(yǎng)方法，并進(jìn)行優(yōu)化改進(jìn)，選用混合消化酶：0.1％胰蛋白酶+0.1%Ⅱ型膠原酶等量制成混合液，以減少了竇房結(jié)自律細(xì)胞的損傷，經(jīng)混

2、合酶液消化并結(jié)合差速貼壁法和5-溴脫氧尿嘧啶核苷（5-Brdu）純化進(jìn)行處理。并通過免疫熒光實(shí)驗(yàn)，觀察HCN4在乳鼠心臟細(xì)胞上的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：采用本方法培養(yǎng)的心臟細(xì)胞存活率為95.8%，培養(yǎng)3-5天，視野中絕大多數(shù)為搏動的心臟細(xì)胞，可觀察到不規(guī)則形細(xì)胞、梭形細(xì)胞及三角形細(xì)胞，未見成纖維細(xì)胞有明顯增殖，其中梭形細(xì)胞最多、細(xì)胞器不發(fā)達(dá)、糖原顆粒不豐富、肌原纖維較少、搏動頻率最快，表達(dá)HCN4,三角形細(xì)胞微量表達(dá)HCN4。