定量緩釋rhBMP-2、rbFGF促進(jìn)兔下頜牽張成骨的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)在研究兔下頜牽張成骨過程中BMP-2和bFGF的時(shí)空表達(dá)的基礎(chǔ)上，應(yīng)用外源性rhBMP-2和rbFGF定量緩釋來促進(jìn)牽張成骨中新骨的成骨速度和質(zhì)量。 第一部分：通過免疫組織化學(xué)方法觀察BMP-2、bFGF在兔下頜骨牽張成骨中的時(shí)空表達(dá)。 研究材料與方法：將12只新西蘭大白兔分為牽張成骨組和部分下頜骨缺損組。其中牽張成骨組8只，部分下頜骨缺損組4只，實(shí)驗(yàn)組安置口外牽張器，經(jīng)7天間歇期后，按0.5mm/12h的速率延長

2、下頜骨6mm。在牽張期第1天、第6天、固定期第7天和第28天分別處死牽張成骨組動(dòng)物2只和部分骨缺損組動(dòng)物1只，取牽張區(qū)及骨缺損區(qū)骨痂用免疫組化方法檢測不同時(shí)間內(nèi)BMP-2、bFGF表達(dá)水平的變化。 研究結(jié)果：下頜骨牽張后BMP-2和bFGF表達(dá)增強(qiáng)，其陽性信號(hào)主要定位于間充質(zhì)細(xì)胞和新生骨小梁邊緣的成骨細(xì)胞。結(jié)果表明BMP-2和bFGF的陽性信號(hào)在牽張期和固定期早期較間歇期和固定期后期表達(dá)更強(qiáng)烈。 研究結(jié)論：實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在

3、牽張成骨中bFGF和BMP-2是局部調(diào)整的角色。壓力刺激成骨細(xì)胞和其他類型細(xì)胞分泌bFGF和BMP-2。這兩種因子在牽張期及固定期早期起重要作用，能誘導(dǎo)間充質(zhì)細(xì)胞分化為成骨細(xì)胞。 第二部分：采用溶劑揮發(fā)法制備rbFGF/PLGA植入片，探討rbFGF/PLGA植入片定量緩釋情況及其對兔下頜牽張成骨促進(jìn)成骨的作用。 研究材料與方法：18只新西蘭大白兔隨機(jī)分為兩組，每組9只，建立兔下頜雙側(cè)牽張成骨動(dòng)物模型。通過溶劑揮發(fā)法制備

4、rbFGF/PLGA植入片，并植入實(shí)驗(yàn)組，對照組植入空白PLGA。所有動(dòng)物采用標(biāo)準(zhǔn)的牽張方式(間歇期7天，牽張速率0.5mm/12h，共牽張6天)，在固定期第1周、第3周、第6周分別處死兩組動(dòng)物各3只，取材，對標(biāo)本進(jìn)行組織學(xué)、影像學(xué)、生物力學(xué)檢查，并進(jìn)行ALP活性測定及骨鈣素含量測定評估新生骨質(zhì)量。 研究結(jié)果：rbFGF/PLGA植入片表面光滑圓整，均勻度好，體外具有定量緩釋作用。兔下頜骨延長后牽張間隙均有新骨形成，實(shí)驗(yàn)組新生骨

5、組織比對照組更為成熟，新生骨形成速度和骨小梁密度均優(yōu)于對照組。 研究結(jié)論：rbFGF/PLGA植入片制備工藝良好，植入片中rbFGF生物活性保存良好，體外具有定量緩釋作用，能明顯促進(jìn)兔下頜牽張成骨質(zhì)量。 第三部分：制備可以定量緩釋的rhBMP-2聚氰基丙烯酸正丁酯納米微粒緩釋劑，考察其一般性質(zhì)和體外釋藥特性。研究局部使用緩釋rhBMP-2納米微粒對兔下頜牽張成骨中促進(jìn)成骨的作用。 研究材料與方法：采用乳化溶液聚合

6、法制備rhBMP-2納米微粒，18只新西蘭大白兔隨機(jī)分為兩組，每組9只，建立兔下頜雙側(cè)牽張成骨動(dòng)物模型。以0.5mm/12h的速率牽張共延長兔下頜骨6mm。于牽張期開始連續(xù)10天于牽張間隙注射rhBMP-2納米微粒，對照組分別注射等量不含rhBMP-2聚氰基丙烯酸正丁酯乳液。固定期第1周，第3周，第6周分別處死兩組動(dòng)物各3只，檢測血清骨鈣素含量和ALP活性，取材后進(jìn)行影像學(xué)、組織形態(tài)學(xué)觀察，取下頜新骨進(jìn)行生物力學(xué)和骨礦物密度(BMD)檢

7、測。 研究結(jié)果：電鏡觀察表明rhBMP-2納米微粒形態(tài)規(guī)整，rhBMP-2的包封率為78％，體外緩釋試驗(yàn)表明納米微粒中rhBMP-2至少可以維持十天以上。應(yīng)用rhBMP-2納米微粒組的新骨形成速度、質(zhì)量及骨小梁的密度均高于對照組。 研究結(jié)論：采用聚氰基丙烯酸正丁酯制得rhBMP-2納米微粒具有確定的緩釋作用，能夠有效維持rhBMP-2濃度，在體內(nèi)外可以延長rhBMP-2的作用時(shí)間，可作為注射性骨誘導(dǎo)制劑。局部應(yīng)用rhBM