MicroRNa-182對結直腸癌發(fā)展,預后以及細胞遷移能力的研究.pdf

1、目的:
　　 檢測microRNA-182(miR-182)在結直腸癌與相應癌旁組織中的表達，并評估其在結直腸癌發(fā)生發(fā)展和預后中的價值。此外，進一步檢測miR-182在轉移性結直腸癌中的表達并與非轉移癌中的表達相比較，并用體外實驗探討其對結直腸癌細胞遷移能力的影響，進而評估m(xù)iR-182在結直腸癌轉移中的作用。
　　 方法:
　　 1.應用實時熒光定量PCR技術檢測173對結直腸癌（包括148例非轉移癌，25例轉

2、移癌）與對應癌旁組織miR-182的表達情況。
　　 2.用Mann-WhitneyU檢驗或Kruskal-Wallis檢驗來評估m(xù)iR-182表達情況與結直腸癌病人臨床病理參數(shù)之間的關系。
　　 3.以Kaplan-Meier法描述miR-182及其它參數(shù)的生存曲線，并用對數(shù)秩檢驗(log-ranktest)比較各生存曲線之間的差異。
　　 4.用COX相對危險回歸法分析miR-182及其它參數(shù)在結直腸癌中的預

3、后價值。
　　 5.體外用脂質體2000(lipofectamineTM2000)將miR-182模擬物及陰性對照瞬時轉染結直腸癌HT-29細胞，并用實時熒光定量PCR檢測各組轉染效率。
　　 6.用transwell小室實驗觀察各實驗組細胞遷移數(shù)，來研究miR-182對結直腸癌細胞HT-29遷移能力的影響。
　　 結果:
　　 1.結直腸癌組織中miR-182的表達水平顯著高于對應癌旁組織(p＜0.00

4、1)，轉移性癌組織miR-182的表達顯著高于非轉移癌(p=0.0166)。
　　 結果顯示miR-182在不同組織中的表達差異較大，在148對非轉移結直腸癌組織中的相對表達量是0.147(0.075-0.277){中位數(shù)（四分位數(shù)）），其對應癌旁組織中的相對表達量是0.051(0.019-0.117){中位數(shù)（四分位數(shù)））;另外miR-182在25對轉移性結直腸癌組織中的相對表達量是0.254(0.134-0.538){中位數(shù)

5、（四分位數(shù)）），其對應癌旁組織中的相對表達量是0.045(0.014-0.131){中位數(shù)（四分位數(shù)））。
　　 2.結直腸癌組織miR-182表達水平與患者臨床病理參數(shù)的關系
　　 結直腸癌患者組織miR-182表達水平與患者的腫瘤大小(p=0.016)，局部淋巴結轉移(p=0.008)和臨床分期(p=0.020)密切相關，而與患者的年齡、性別、腫瘤類型、腫瘤浸潤程度和分化程度無關(p＞0.05)。
　　 3.

6、結直腸癌組織miR-182表達水平與患者生存時間相關
　　 隨訪的148例結直腸癌患者中，五年總體生存率為56.8％，根據(jù)miR-182在結直腸癌組織中表達的中位數(shù)分成高表達組和低表達組，其中miR-182高表達組的五年生存率為43.2％，miR-182低表達組的五年生存率為70.3％，可見miR-182高表達組的生存率顯著低于低表達組(p=0.001)。通過Kaplan-Meier生存曲線分析顯示結直腸癌患者的生存時間還與腫瘤

7、浸潤程度(p=0.022)，局部淋巴結轉移(p＜0.001)和臨床分期(p＜0.001)密切相關，而與患者的年齡、性別、腫瘤類型、腫瘤大小和分化程度無關(p＞0.05)。
　　 4.COX相對危險回歸法結果顯示miR-182表達水平是結直腸癌患者獨立的預后因素
　　 COX相對危險回歸法單因素分析顯示，結直腸癌組織中miR-182表達水平(HR=2.313;95％CI，1.379-3.879;p=0.001)，腫瘤浸潤程

8、度(HR=2.214;95％CI，1.094-4.483;p=0.027)，局部淋巴結轉移(HR=3.523;95％CI，2.105-5.899;p＜0.001)和臨床分期(HR=2.975;95％CI1.943-4.555;p＜0.001)都與結直腸癌患者預后相關;COX相對危險回歸法多因素分析顯示，miR-182表達水平(HR=1.790;95％CI，1.057-3.032;p=0.030)和局部淋巴結轉移(HR=2.899;95％

9、CI，1.704-4.933;p＜0.001)是結直腸癌患者的獨立預后因素。
　　 5.Transwell小室實驗表明miR-182能夠促進結直腸癌細胞HT-29的遷移能力
　　 HT-29細胞轉染miR-182模擬物24小時后，其表達水平較對照組顯著升高(p＜0.05）。MiR-182過表達的HT-29細胞遷移數(shù)(61±9)顯著高于陰性對照組(29±5)(p＜0.05)和空白對照組(27±4)(p＜0.05)。

10、　　 結論:
　　 1.MiR-182在結直腸癌中高表達，并且與患者的腫瘤大小，局部淋巴結轉移和臨床分期密切相關，提示其在結直腸癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。
　　 2.MiR-182高表達組的生存率顯著低于低表達組，并且COX相對危險回歸法結果顯示miR-182水平是結直腸癌患者獨立的預后因素，提示其可作為結直腸癌患者的一個獨立的預后分子和潛在治療靶點。
　　 3.MiR-182在轉移性結直腸癌中高表達，且高