艾灸“膝眼”穴對實驗性膝關節(jié)骨性關節(jié)炎轉化生長因子系統(tǒng)影響的研究.pdf

1、目的：骨關節(jié)炎(Osteoarthritis，OA)，又名骨關節(jié)病，是一種表現(xiàn)為關節(jié)軟骨退化和關節(jié)邊緣新骨生成，即骨贅生成的關節(jié)疾病。膝關節(jié)OA在OA中最為常見，是引起膝關節(jié)痛的主要原因之一，并且發(fā)病率隨年齡而增加，是影響老年人運動及慢性殘疾的首要原因，因此尋找一種安全、高效的治療方法，已成為醫(yī)學研究者關注的熱點。本課題以膝關節(jié)注射 MIA 形成的膝關節(jié) OA 的大鼠模型為研究對象，從而探討膝關節(jié) OA 動物模型膝關節(jié)組織結構的改變及艾

2、灸對其影響，在分子水平上研究艾灸對膝關節(jié) OA 大鼠膝關節(jié)轉化生長因子β1 (Transforming Growth Factor-β1，TGF-β1)、轉化生長因子β3 (Transforming Growth Factor-β3，TGF-β3)及蛋白多糖(Proteoglycan，PTG)表達的影響及其作用機理，從而評價艾灸干預膝關節(jié) OA 發(fā)生發(fā)展的可行性，為臨床治療提供實驗依據(jù)。 方法：選用2月齡雄性 Wistar 大鼠

3、 39 只，體重175-200g，隨機分為正常組、模型組、艾灸組，每組 13 只。將除正常組以外的2組大鼠用10％水合氯醛按4ml/kg的標準腹腔注射麻醉，在無菌條件下，穿過髕下韌帶，予以膝關節(jié)內(nèi)注射，右膝注射 MIA，按1mgMIA：50μl生理鹽水標準稀釋，左膝注射50μl 生理鹽水，標準飼養(yǎng) 28 天后將各組大鼠各隨機處死一只，取其關節(jié)軟骨做蘇木精-伊紅染色，光鏡觀察關節(jié)軟骨組織結構變化是否符合骨性關節(jié)炎變化，以確定造模成功。1.

4、28 天后開始治療，正常組、造模組不做任何處理，開始進行艾灸治療，取右側膝眼，采用溫和灸，20 分鐘/次，距離皮膚2～3 cm，1次/日，10 天為1療程，療程間休息1天，共治療3個療程。治療時以5％異氟烷(與空氣混合)輕度吸入性麻醉。2.末次治療后禁食 24 小時后處死，取整個膝關節(jié)。將其中一半樣本用 5％甲酸脫鈣，常規(guī)石蠟包埋，7μm 連續(xù)切片，貼于 APES 防脫片膠處理的載玻片備染。另一半樣本置于RPMI medium/0.1％

5、BSA，溫箱中培養(yǎng) 10 小時。3.采用免疫組織化學方法(ABC法)檢測TGF-β1和TGF-β3；酶聯(lián)免疫法檢測TGF-β1、TGF-β3 的含量；組織化學染色法測定骨贅大小及軟骨中PTG的含量。 結果：1．膝關節(jié)注射 MIA 可形成典型的實驗性膝關節(jié) OA 大鼠模型，造模大鼠的膝關節(jié)軟骨骨贅面積與正常大鼠相比，明顯增多，有非常顯著性差異(P<0.01)。2．實驗性膝關節(jié) OA 大鼠膝關節(jié)軟骨中PTG的含量較正常組降低。經(jīng)統(tǒng)計

6、學處理，有非常顯著性差異(P<0.01)。3．實驗性膝關節(jié) OA 大鼠膝關節(jié)軟骨中TGF-β1、TGF-β3 的表達及含量較正常組明顯升高。造模組大鼠的 TGF-β1 含量，與正常組相比，有顯著性差異(P<0.05)；造模組大鼠的 TGF-β3含量，與正常組相比，有非常顯著性差異(P<0.01)。4．艾灸“膝眼”穴治療可明顯降低實驗性膝關節(jié) OA 大鼠膝關節(jié)軟骨骨贅面積，艾灸治療組膝關節(jié)軟骨骨贅面積與造模組比較，有非常顯著性差異(P<0

7、.01)。5．艾灸“膝眼”穴治療可提高實驗性膝關節(jié) OA 大鼠膝關節(jié)軟骨中 PTG的含量，與造模組比較，有非常顯著性差異(P<0.01)。6．艾灸“膝眼”穴治療可明顯降低實驗性膝關節(jié) OA 大鼠膝關節(jié)軟骨TGF-β1、TGF-β3 的表達含量。經(jīng)統(tǒng)計學處理，艾灸治療組TGF-β1 含量與造模組比較，有顯著差異(P<0.05)；艾灸治療組TGF-β3與造模組相比，有非常顯著性差異(P<0.01)。 結論：艾灸“膝眼”穴可延緩或改善