足癬患者血清IL-12、IFN-γ、iNOS、NO表達(dá)水平的研究.pdf

1、目的：足癬呈世界性分布，一些需長(zhǎng)時(shí)間穿不透氣膠鞋和長(zhǎng)統(tǒng)靴的職業(yè)中，患病率高達(dá)80％以上。其致病真菌主要是紅色毛癬菌，不規(guī)范治療導(dǎo)致疾病復(fù)發(fā)和耐藥菌的產(chǎn)生。 近期研究表明，天然免疫在抗真菌免疫中起重要作用，可直接殺傷病原體并能激發(fā)適應(yīng)性免疫。入侵的真菌等病原體被天然免疫系統(tǒng)識(shí)別是激發(fā)宿主產(chǎn)生免疫應(yīng)答的第一步。一旦真菌感染，體內(nèi)的吞噬細(xì)胞活化，分泌包括IL-12的多種細(xì)胞因子和炎性介質(zhì)。IL-12是觸發(fā)天然免疫應(yīng)答的關(guān)鍵因子，也是激

2、活Th1細(xì)胞介導(dǎo)特異性免疫應(yīng)答的必要條件。IL-12對(duì)非特異免疫和特異性免疫都發(fā)揮重要作用，其架起非特異免疫和特異性免疫之間的橋梁，是一種前炎癥細(xì)胞因子。 IL-12能強(qiáng)有力地誘導(dǎo)天然免疫的NK細(xì)胞、APC及獲得性免疫的Th1細(xì)胞等產(chǎn)生IFN-γ等細(xì)胞因子。INF-γ又是一個(gè)潛在的強(qiáng)有力的IL-12誘導(dǎo)因子，它的產(chǎn)生依賴(lài)于IL-12，但它產(chǎn)生以后反過(guò)來(lái)增加IL-12的分泌。IFN-γ作用于巨噬細(xì)胞產(chǎn)生誘生一氧化氮合酶(induc

3、ible NO synthase,iNOS)，生成NO，而NO是清除真菌病原體的重要效應(yīng)分子。NO在炎癥反應(yīng)的許多環(huán)節(jié)中發(fā)揮復(fù)雜的調(diào)節(jié)作用，其對(duì)外界病原微生物具有毒性作用。上述四種細(xì)胞因子由此構(gòu)成一個(gè)正反饋途徑，同時(shí)作為一個(gè)功能單位，可促進(jìn)特異性免疫應(yīng)答，成為聯(lián)系天然免疫和獲得性免疫應(yīng)答的紐帶。紅色毛癬菌引起的足癬患者臨床表現(xiàn)多為磷屑角化型，病程慢性且易復(fù)發(fā)。本研究通過(guò)對(duì)足癬患者血清中IL-12、IFN-γ、iNOS、NO水平的檢測(cè)，以

4、探討紅色毛癬菌引起的足癬患者免疫功能是否存在異常以及這四種細(xì)胞因子在免疫發(fā)病機(jī)制中所起的作用。 方法：1、病例選擇患者組30例足癬患者(真菌培養(yǎng)均為紅色毛癬菌)均來(lái)自河北醫(yī)科第二醫(yī)院皮膚科門(mén)診。 入選標(biāo)準(zhǔn)：凡臨床癥狀典型，真菌直接鏡檢陽(yáng)性，診斷為足癬，且培養(yǎng)確定是紅色毛癬菌者，年齡18～70歲，非妊娠及哺乳期婦女，就診前1周內(nèi)未外用或1個(gè)月內(nèi)未系統(tǒng)應(yīng)用過(guò)抗真菌藥，以及2個(gè)月內(nèi)未用皮質(zhì)類(lèi)固醇激素和免疫抑制劑等影響全身免疫功

5、能藥物的患者。 排除標(biāo)準(zhǔn)：就診前1周內(nèi)曾外用或1個(gè)月內(nèi)系統(tǒng)應(yīng)用過(guò)抗真菌藥，以及2個(gè)月內(nèi)曾用皮質(zhì)類(lèi)固醇激素和免疫抑制劑的患者，及合并有其它系統(tǒng)性疾病和免疫性疾病的患者。 對(duì)照組：來(lái)自健康志愿者，共20例。均無(wú)足癬疾患和自身免疫性疾病及家族史。經(jīng)t檢驗(yàn)，性別、年齡與病例組無(wú)顯著差異。 2、征得患者同意采靜脈血5毫升，提取血清分裝，一20℃保存?zhèn)溆谩?3、取材及培養(yǎng)：用鈍刀刮取病變處鱗屑(或剪取皰壁)，同時(shí)做真

6、菌鏡檢和培養(yǎng)。采用25℃恒溫培養(yǎng)，隨時(shí)觀(guān)察培養(yǎng)情況，4周以上無(wú)菌落生長(zhǎng)判定為陰性。 4、菌種鑒定：皮膚癬菌主要根據(jù)菌落形態(tài)、小培養(yǎng)的鏡下結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定，確定真菌的種屬。 5、細(xì)胞因予測(cè)定：采用雙抗體夾心ELISA方法分別檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組血清中IL-12、IFN-γ的濃度；應(yīng)用721分光光度計(jì)法測(cè)定實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組血清中iNOS、NO的濃度。操作過(guò)程均按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。 6、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：所得數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)

7、計(jì)學(xué)處理，數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-x±s)表示，采用t檢驗(yàn)分析足癬患者與正常對(duì)照組， IL-12、IFN-γ、iNOS、NO的血清水平有無(wú)顯著性差異； P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果：檢驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，兩樣本t檢驗(yàn)。1.血清中IL-12測(cè)定結(jié)果(單位pg/ml)：足癬患者血清IL-12平均值為8.0633±1.936，對(duì)照組為11.6115±2.424，病例組水平低于對(duì)照組，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

8、2.血清中IFN-γ測(cè)定結(jié)果(單位pg/ml)：足癬患者血清IFN-γ平均值為9.1763±1.033，對(duì)照組為113.3555±1.506，病例組水平低于對(duì)照組，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.血清中iNOS測(cè)定結(jié)果(單位U/ml)：足癬患者血清iNOS平均值為11.4270±1.007,對(duì)照組為20.4315±0.795，病例組水平低于對(duì)照組，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4.血清中NO測(cè)定結(jié)果(單位μmol/L)：足癬患者血