大黃魚肌纖維生長和脂肪沉積規(guī)律以及甲狀腺激素的作用.pdf

1、本實驗以中國四大海產經濟魚類大黃魚為研究對象，探討大黃魚肌纖維發(fā)育和肌肉脂肪沉積的規(guī)律；首次克隆了大黃魚生長激素受體(GHR)和甲狀腺激素受體(TRα和TRβ)cDNA的部分序列；在此基礎上研究了這些受體mRNA表達與肌肉生長和脂肪沉積之間的關系；并通過分析脂肪代謝相關的生理生化指標與成年大黃魚肌肉脂肪含量之間的關系，進一步探索甲狀腺激素及其受體在大黃魚肉質形成過程中的作用。 1 肌纖維直徑分布和肌肉脂肪含量的比較 運用

2、組織學方法測定1齡和2齡大黃魚軸上肌肌纖維直徑，并分析肌纖維直徑的分布情況，同時采用乙醚抽提法測定肌肉脂肪含量。結果表明：1齡和2齡大黃魚肌纖維直徑均呈單峰分布。1齡魚肌纖維直徑主要分布在200-400μm之間，而2齡魚主要分布在200-500μm之間，并且2齡魚肌纖維直徑分布的跨度要廣，2齡魚平均肌纖維直徑顯著大于1齡魚(p<0.01)。肌肉脂肪含量在兩個年齡之間沒有表現出顯著的差異。 2 成年大黃魚肌肉脂肪含量和脂肪酸組成的

3、分析 運用乙醚抽提法測定2.5齡大黃魚軸上肌脂肪含量。根據肌肉脂肪含量高低，分為低脂肪含量組(LF組)和高脂肪含量組(HF組)，運用氣相色譜分析兩組肌肉中8種脂肪酸組成。結果表明：采集的70尾大黃魚軸上肌脂肪含量分布范圍廣(23.7％．57.9％，干基計算)且變異很大，服從正態(tài)分布。LF組和HF組脂肪含量差異極顯著(p<0.01)。檢測的8種脂肪酸中，LF組飽和脂肪酸比例>多不飽和脂肪酸>單不飽和脂肪酸?？傮w而言，HF組飽和脂肪

4、酸顯著高于LF組，而多不飽和脂肪比例顯著低于LF組，其中主要是n-3多不飽和脂肪酸比例的下降，但n-3／n-6沒有差異。單個脂肪酸中，HF組DHA和EPA有下降的趨勢(p=0.06，p=0.07)，棕櫚酸含量有上升的趨勢(p=0.06)。 3 脂肪代謝相關生理生化指標的測定 檢測HF組和LF組血液中游離脂肪酸(FFA)、甘油三酯(TG)、甲狀腺激素水平及組織中FFA水平、蘋果酸酶的活性，并進行相關性分析。結果表明：HF組

5、血清中游離脂肪酸和甘油三酯水平分別比LF組高出60.7％和28.0％，其中游離脂肪酸水平兩組間差異顯著(p<0.01)。血清中TG和FFA水平呈較強的正相關(R=0.69，p<0.01)。HF組肝臟中游離脂肪酸含量顯著高于LF組(p<0.01)，軸上肌中游離脂肪酸水平比LF組提高了32.7％，但差異不顯著。血清中T3水平兩組間差異不顯著，但隨著脂肪含量的增加，T<,3>有上升的趨勢(p=0.09)。蘋果酸酶的活性在組織間和組間均沒有顯著

6、性差異。相關性分析結果表明軸上肌脂肪含量與肝臟游離脂肪酸含量呈較強的正相關(R=0.64，p<0.01)，同血液中T<，3>水平呈中等強度正相關(R=0.44，p<0.05)；血液中T<，3>水平與軸上肌FFA水平呈中等強度的正相關(R=0.46，p<0.05)。提示甲狀腺激素在肌肉脂肪沉積過程中有重要作用。4生長激素和甲狀腺激素受體的克隆與表達用放射免疫分析法，測定大黃魚血液中甲狀腺激素水平。發(fā)現1齡和2齡大黃魚血清中T<，3>水平沒

7、有顯著差異，均在14ng/ml左右，而隨著年齡的增長，血清中T<，4>水平下降了近30％，年齡間差異顯著(p<0.05)。血清中T<，3>/T<，4>值在1齡魚和2齡魚之間差異不顯著。運用RT-PCR方法克隆GHR以及TRs cDNA的部分序列，并測定肝臟和肌肉中這些受體mRNA表達的變化。結果表明：經blast比較，克隆所得到的GHR片段是2型GHR受體，與羅非魚的同源性為82％，與黑鯛的同源性為83％，與烏頰魚的同源性為87％，與日

8、本青鳉的同源性為91％?？寺∷玫降腡Rs片段分別是TR的兩個亞型：TRα和TRβ，與大菱鲆的同源性分別為94％、94％，與雞的同源性為83％、67％，與人的同源性為78％、70％。與1齡魚相比，2齡魚肝臟中TRβ和GHR mRNA表達均顯著下調(p<0.01)，而TRα mRNA表達沒有變化。1齡和2齡魚肌肉中均沒有檢測到GHR的表達。肌肉中TRs表達模式與肝臟不同，TRβ mRNA表達沒有顯著性變化，而TRα mRNA表達顯著上調(

9、p<0.01)。提示2齡大黃魚生長速度減緩可能與肝臟中GHR及TRβ表達下調有關，而2齡大黃魚肌纖維肥大可能主要由肌肉TRα介導。5脂肪代謝相關功能基因表達的差異 用相對定量RT-PCR方法測定生長激素受體(GHR)、甲狀腺激素受體(TRs)及肉堿轉移酶(CPT)mRNA表達的變化。結果表明：HF組和LF組肝臟中CPT和GHR mRNA的表達沒有顯著性差異，但HF組GHR mRNA表達有下降的趨勢(p=0.06)。肌肉中未檢測到GHR