暢肺防喘方對(duì)哮喘大鼠氣道重構(gòu)和炎癥介質(zhì)的影響的試驗(yàn)研究.pdf

1、目的:暢肺防喘方是課題組多年來(lái)治療哮喘的經(jīng)驗(yàn)方，應(yīng)用于臨床療效顯著，該方能有效緩解患者支氣管痙攣，提高患者生活質(zhì)量。其免疫作用已有初步探索。本課題擬在前期臨床觀察和實(shí)驗(yàn)研究的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步從分子生物學(xué)和免疫學(xué)水平，研究暢肺防喘方防治哮喘的作用機(jī)制。本課題通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)，運(yùn)用血清藥理學(xué)方法，研究該方對(duì)支氣管平滑肌細(xì)胞的抑制增殖作用；并通過(guò)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，觀察該方對(duì)哮喘模型大鼠的平喘作用和對(duì)其支氣管、肺組織形態(tài)學(xué)的影響，研究其血液、肺泡灌洗液中EO

2、S(嗜酸性粒細(xì)胞)、IgE及相關(guān)趨化因子Eotaxin(嗜酸性粒細(xì)胞趨化蛋白)、ICAM-1(細(xì)胞間粘附分子-1)表達(dá)水平的變化。進(jìn)一步從細(xì)胞和分子生物學(xué)水平探討暢肺防喘方治療哮喘的作用機(jī)理，從而為開(kāi)發(fā)臨床防治哮喘的有效中藥制劑奠定基礎(chǔ)。 方法: 1、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)方法：取大鼠支氣管肺泡灌洗液(BALF)進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類，對(duì)其上清液以雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法進(jìn)行細(xì)胞因子Eotaxin、ICAM-1含量的測(cè)定；血細(xì)

3、胞計(jì)數(shù)分類，放免法檢測(cè)血中IgE含量；制備大鼠支氣管及肺組織切片，HE染色，觀察氣道重構(gòu)情況；免疫組化法檢測(cè)肺及支氣管局部組織Eotaxin、ICAM-1的表達(dá)。 2、體外實(shí)驗(yàn)方法：含藥血清制備；MTT酶標(biāo)法、免疫細(xì)胞化學(xué)(ICC)法測(cè)支氣管平滑肌細(xì)胞的增殖水平，以了解該方對(duì)抗哮喘氣道重構(gòu)的作用。 結(jié)果: 1、體內(nèi)試驗(yàn)： 1.1實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示暢肺防喘方可顯著降低WBC數(shù)量，尤其是嗜酸性細(xì)胞(P＜0.01)，

4、說(shuō)明該方可明顯改善呼吸道炎性癥狀。實(shí)驗(yàn)結(jié)果還表明血清IgE的含量降低，說(shuō)明其治療和預(yù)防作用可能是通過(guò)此途徑來(lái)實(shí)現(xiàn)的，為暢肺防喘方治療支氣管哮喘的臨床應(yīng)用提供了有力的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 1.2 ELISA法結(jié)果顯示：與正常組比較模型組支氣管肺泡灌洗液中Eotaxin、ICAM-1均顯著升高，經(jīng)治療后，上述指標(biāo)均顯著降低。說(shuō)明暢肺防喘方可顯著抑制哮喘大鼠Eotaxin、ICAM-1表達(dá)。前期研究表明，該方對(duì)EOS的抑制作用較為明顯。EOS浸

5、潤(rùn)是哮喘炎癥的顯著病理生理特征，EOS向炎癥部位趨化、募集，是哮喘病癥中重要的病理過(guò)程，其過(guò)程機(jī)制與Eotaxin、ICAM-1等關(guān)系密切。結(jié)果提示，對(duì)Eotaxin、ICAM-1的抑制作用可能是暢肺防喘方治療哮喘的作用機(jī)制之一。 1.3肺組織病理切片HE染色顯示，抗原激發(fā)后模型組肺組織嗜酸性粒細(xì)胞和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)與對(duì)照組相比有明顯增多(P＜0.01)。 2、體外實(shí)驗(yàn)：本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)暢肺防喘方高、中、小劑量組含藥血清對(duì)支氣管平

6、滑肌增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)表達(dá)的平均光密度明顯高于對(duì)照組(P＜0.05)，與地塞米松組無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，它與MTT。法觀察結(jié)果一致。本次實(shí)驗(yàn)證明，與對(duì)照組比較，暢肺防喘方高、中劑量含藥血清組能明顯抑制大鼠支氣管平滑肌細(xì)胞(ASMC)的增殖，與地塞米松含藥血清組比較無(wú)顯著性差異，而暢肺防喘方小劑量含藥血清組則無(wú)明顯作用，考慮可能與藥物濃度有關(guān)。且隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)，含藥血清對(duì)支氣管平滑肌細(xì)胞的抑制作用有增強(qiáng)趨勢(shì)。說(shuō)明暢肺防

7、喘方可能通過(guò)抑制組胺(His)促ASMC增殖作用而達(dá)到防治哮喘的效果，且存在一定的劑量、時(shí)間依賴關(guān)系。 結(jié)論: 1、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：證實(shí)了暢肺防喘方的平喘作用(癥狀改善，血中IgE、EOS，BALF中EOS含量下降，支氣管及肺形態(tài)學(xué)的變化)和作用機(jī)制(抑制趨化因子Eotaxin和粘附分子ICAM-1的表達(dá))。 2、體外實(shí)驗(yàn)：運(yùn)用血清藥理學(xué)方法證實(shí)了暢肺防喘方有較好的抗哮喘大鼠氣道重構(gòu)的作用(抑制支氣管平滑肌細(xì)胞增殖)和