肌肉注射sRAGE基因?qū)Ω咧痛笫笾|(zhì)代謝、慢性炎癥狀態(tài)及重要器官的作用.pdf

1、背景及目的：高脂餐飲食促使動脈粥樣硬化、血脂異常、胰島素抵抗等發(fā)病，現(xiàn)代生活習(xí)慣使之呈流行趨勢，近年研究表明慢性炎癥和胰島素抵抗相輔相成?，F(xiàn)代飲食以高脂、高熱量為特征，高溫烹制的食物富含晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGE)，AGE與與其受體(RAGE)結(jié)合，通過NADPH及NF-кB通路，激活巨噬細(xì)胞，可導(dǎo)致氧化應(yīng)激，引起多種促炎因子產(chǎn)生，一次攝入雖可使循環(huán)中AGE升高，使機(jī)體短時間內(nèi)產(chǎn)生氧化應(yīng)激狀態(tài)，炎癥因子水平升高，但停止攝入后機(jī)體AGE水

2、平逐漸下降，氧化應(yīng)激逐漸消退，但如果長期大劑量攝入，則會超出機(jī)體的代償能力，表現(xiàn)為慢性炎癥狀態(tài)。減少食物中的AGE、阻斷．AGE與RAGE結(jié)合可降低機(jī)體慢性炎癥狀態(tài)，使db/db大鼠胰島素抵抗減輕，NOD小鼠和高脂餐C57/B6小鼠糖尿病發(fā)生減少，糖尿病慢性并發(fā)癥(動脈粥樣硬化、微血管并發(fā)癥)減輕。新近研究發(fā)現(xiàn)體內(nèi)存在一種缺失細(xì)胞跨膜段及細(xì)胞內(nèi)段的RAGE(又稱為sRAGE)具有與AGE結(jié)合的能力，限制了AGE與細(xì)胞膜上完整的RAGE結(jié)

3、合的能力，阻斷AGE所導(dǎo)致的細(xì)胞氧化應(yīng)激，減輕機(jī)體慢性免疫反應(yīng)狀態(tài)。本研究的目的是通過肌肉注射sRAGE基因，觀察sRAGE對高脂餐大鼠機(jī)體氧化應(yīng)激狀態(tài)、脂質(zhì)代謝、胰島素抵抗及主動脈內(nèi)膜、肝臟、腎臟的改變的影響。探討肌肉注射sRAGE基因防治高脂餐大鼠代謝紊亂及重要器官損傷的作用。 方法： 1．動物實驗：取SD大鼠28只(體重150～160g，6周齡)，隨機(jī)分為3組：高脂餐治療組、高脂餐對照組和普通餐對照組。高脂餐大鼠先

4、以高脂餐喂養(yǎng)8周，第9周10只在雙側(cè)后腿肌內(nèi)各注射pLNCX<,2>-sRAGE 300μg(高脂餐治療組)，10只注射pLNCX<,2>質(zhì)粒300μg/側(cè)(高脂餐對照組)：分別于第12周、第15周重復(fù)注射一次，第17周處死。8只同期普通飼料喂養(yǎng)的大鼠(普通餐對照組)在第17周處死。骨骼肌注射pLNCX<,2>-sRAGE和pLNCX<,2>質(zhì)粒方法：4﹪水合氯醛腹腔麻醉大鼠，暴露雙側(cè)后腿肌肉，各注射質(zhì)粒300gg，以電極相距20mm給

5、予方波電脈沖(電壓200V/cm，波寬40CM，脈沖次數(shù)9，頻率1HZ)刺激，以增加基因轉(zhuǎn)移效率。 2.三組大鼠分別于每次注射后的1、2、3周斷尾取血測定SOD、MDA值。第17周處死前測空腹血糖和體重，處死后立即取心臟血、主動脈、肝臟和腎臟，進(jìn)行血清胰島素、甘油三脂、總膽固醇、TNF-α、超敏CRP、SOD、MDA測定，腎臟和主動脈病HE染色，應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色觀察經(jīng)不同措施處理的大鼠的腎臟FGF-β1、肝臟NF-κB的表達(dá)

6、。 結(jié)果： 1.高脂餐對照組體重、血糖、血清胰島素、甘油三脂、總膽固醇、超敏CRP、TNF-α較普通餐對照組明顯升高，與高脂餐對照組相比高脂餐治療組除體重和超敏CRP輕度下降無統(tǒng)計學(xué)差異、甘油三脂顯著升高外，其余各指標(biāo)下降有統(tǒng)計學(xué)差異。 2.高脂餐治療組大鼠注射基因后SOD水平逐漸上升，到第1次注射后3周與高脂餐對照組呈現(xiàn)統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)， 高脂餐治療組大鼠注射基因后血MDA水平開始下降，1次注射后2

7、周與高脂餐對照組有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)，在1次注射后3周有所升高；重復(fù)注射SOD繼續(xù)升高，至接近普通餐對照組不再升高，MDA再次下降。 3.sRAGEX寸重要器官作用情況：普通餐對照組和高脂餐治療組均未見動脈粥樣硬化，但高脂餐對照組動脈內(nèi)膜不完整，內(nèi)皮壞死脫落，局部內(nèi)膜略增厚，有動脈粥樣硬化早期損傷的表現(xiàn)；高脂餐對照組腎小球系膜細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)增多，TFGF-β1呈現(xiàn)高表達(dá)，而高脂餐治療組以上變化則較輕微，普通餐對照組皮質(zhì)

8、部腎小體和腎小管結(jié)構(gòu)完好，TGF-β1低水平表達(dá)，TGF-β1三組間差異顯著(P<0.01)；高脂餐對照組肝臟NF-кB表達(dá)增加，普通餐對照組呈低水平表達(dá)，高脂餐治療組介于兩者之間，三組間差異顯著(P<0.01)。 結(jié)論： 1.高脂飲食使大鼠體內(nèi)氧化應(yīng)激水平升高，抗氧化能力減弱，骨骼肌注射sRAGE基因可以降低高脂餐大鼠的氧化應(yīng)激水平，抗氧化能力增強。 2.高脂餐可引起胰島素抵抗，膽固醇水平升高；出現(xiàn)動脈粥樣硬化