p73基因新轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的克隆及分析.pdf

1、p73基因是p73基因家族的第一個(gè)新成員,是1997年8月一個(gè)法國和美國聯(lián)合研究小組在篩選介導(dǎo)胰島素信號(hào)傳遞的因子時(shí)偶然得到的一個(gè)假陽性cDNA克隆,測(cè)序發(fā)現(xiàn)與p73非常相似,被稱為p73.其蛋白產(chǎn)物與p73蛋白在結(jié)構(gòu)和功能上都有著驚人的相似,因互引起了腫瘤生物學(xué)家的極大關(guān)注.該研究首先應(yīng)用于RT-PCR`Nested RT-PCR及HhaI限制性內(nèi)切酶消化的方法,檢測(cè)了結(jié)腸癌LS174T細(xì)胞系p73mRNA第14外顯子中Ala557處

2、的多態(tài)性位點(diǎn).為深入研究結(jié)腸癌LS174T細(xì)胞系中5'端序列發(fā)生變異的p73基因的新轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)和功能,研究人員應(yīng)用5'-RACE方法(Rapid Amplifica-tion of cDNA Ends,cDNA末端快速擴(kuò)增)獲得了等位基因(p73αCTGGA)的兩個(gè)5'-RACE片段,大小分別為2.0kb和1.6kb.研究人員推測(cè)這個(gè)新外顯子E1b的5'末端可能是p73cDNA的一個(gè)新的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)(即mRNA和CAP位點(diǎn)),也就是

3、說,p73基因可能有兩個(gè)轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn),各自受到不同的啟動(dòng)子的調(diào)控.從這兩個(gè)不同的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)開始轉(zhuǎn)錄,并經(jīng)變位剪接(alternative splicing)可產(chǎn)生不同的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物.5'非翻譯區(qū)結(jié)構(gòu)與蛋白質(zhì)翻譯起始作用的調(diào)控有著密切的關(guān)系.該研究表明,應(yīng)用5'-RACE方法在人結(jié)腸癌LS174T細(xì)胞系中克隆出的p73cDNA5'端序列變異的新外顯子E1b,可能含有p73cDNA的一個(gè)新的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn),并參與了p73基因轉(zhuǎn)錄和翻譯水平的廣泛