促性腺激素釋放激素激動劑預(yù)處理在兔卵巢組織玻璃化冷凍與自體移植中作用的實驗研究.pdf

1、第一部分目的：觀察注射GnRH-a組和未注射GnRH-a組兔的凍融卵巢組織內(nèi)各級卵泡的形態(tài)、數(shù)量、凋亡率有無差異，初步探討GnRH-a預(yù)處理對兔卵巢組織冷凍損傷的影響。
　　 方法：（1）選擇動情周期正常的新西蘭雌性大耳白兔18只，隨機分成兩組：GnRH-a組兔注射GnRH-a，對照組兔不注射GnRH-a，每組各9只。（2）GnRH-a組每15天給予0.25mg/kg醋酸亮丙瑞林（GnRH-a）皮下注射,共兩次，30天后手術(shù)摘取

2、雙側(cè)卵巢，一側(cè)卵巢經(jīng)處理后立即行玻璃化冷凍（groupA組），另一側(cè)卵巢不冷凍投入4％多聚甲醛中固定（groupB組）；對照組母兔每15天給予生理鹽水0.3ml皮下注射，共兩次，30天后手術(shù)摘取雙側(cè)卵巢，一側(cè)卵巢經(jīng)處理后立即行玻璃化冷凍（groupC組），另一側(cè)卵巢不冷凍直接投入4％多聚甲醛中固定(groupD組)。（3）groupA組和groupC組玻璃化冷凍方法相同，均采用改良于Kagawa N [1]的方法。（4）HE染色，組織學(xué)

3、分析各組卵巢組織中各級卵泡形態(tài)和數(shù)量的變化；TUNEL法檢測各組卵巢組織中卵泡的凋亡情況。
　　 結(jié)果：（1）組織學(xué)觀察：groupA、groupB、groupC和groupD組形態(tài)正常的卵泡比例分別為71.37％、84.85％、66.57％、82.93％，凍存組正常形態(tài)卵泡比例均較新鮮組低（71.37％vs84.85％；66.57％vs82.93％；P<0.05），groupA組正常形態(tài)卵泡比例較groupC組高，差異有顯著性

4、（71.37％vs66.57％，P<0.05）,groupB組正常形態(tài)卵泡比例較groupD組高，差異無顯著性（84.85％vs82.93％，P>0.05），注射GnRH-a組凍融卵巢組織原始卵泡正常形態(tài)卵泡比例較未注射GnRH-a組凍融卵巢組織高（P<0.05）。（2）凋亡情況：GroupA組，GroupB組，GroupC組和GroupD組中Tunel陽性細(xì)胞比例分別為13.91％,9.21％,12.58％和8.16％,經(jīng)冷凍保存后卵

5、泡凋亡率有所增加(13.91％vs9.21％；12.58％vs8.16％，P<0.05)，但在各冷凍組之間差異無顯著性(13.91％vs12.58％，P>0.05)。
　　 結(jié)論：（1）凍融過程對各級卵泡可造成一定程度的損傷。（2）GnRH-a預(yù)處理改變了卵泡池各級卵泡的構(gòu)成比，增加了原始卵泡比例，有利于卵巢組織增加對凍融過程的耐受。（3）GnRH-a預(yù)處理對卵巢組織細(xì)胞凋亡無影響,凍融過程誘導(dǎo)卵泡凋亡的發(fā)生，可能是凍融損傷的機

6、制之一。
　　 第二部分目的：初步探討GnRH-a預(yù)處理對凍融兔卵巢組織自體移植后卵巢功能恢復(fù)、卵泡生長和血供建立可能產(chǎn)生的影響。
　　 方法：（1）選取動情周期正常的新西蘭雌性大耳白兔22只，隨機分成三組：A組（n=8）：給予0.25mg/kg醋酸亮丙瑞林皮下注射；B組(n=8)：皮下注射生理鹽水；C組(n=6)：假手術(shù)組。（2）A、B組雙側(cè)卵巢手術(shù)取出后進(jìn)行玻璃化冷凍（同實驗一），4周后一部分自體移植于兔兩側(cè)腹股溝區(qū)

7、肌肉層內(nèi)，另一部分用4％多聚甲醛固定用于組織學(xué)觀察。C組取兔下腹部縱切口，暴露雙側(cè)卵巢后即關(guān)腹。（3）手術(shù)后通過陰道上皮細(xì)胞觀察各組動物動情周期的恢復(fù)時間及恢復(fù)率，分別于去勢前、去勢后4周、移植后第30天對各組動物進(jìn)行耳緣靜脈采血，測定血清FSH和E2水平。（4）移植后30天取出移植物，進(jìn)行組織學(xué)觀察。
　　 結(jié)果：（1）手術(shù)后觀察：A組（GnRH組）有2只，B組（對照組）有1只兔在去勢手術(shù)后因感染、失血、護(hù)理不當(dāng)?shù)仍蛩劳觯?/p>

8、余兔身體狀況良好。（2）陰道上皮細(xì)胞觀察：A組兔有4只恢復(fù)動情周期，動情周期恢復(fù)天數(shù)平均為20.00±2.16天，B組兔有5只恢復(fù)動情周期，動情周期恢復(fù)天數(shù)平均為15.80±1.30天，A組兔動情周期恢復(fù)較B組遲，差異有顯著性（P<0.01）；（3）血清學(xué)觀察：A組去勢前E2和FSH水平均較B組低,差異有顯著性（P<0.05）；A、B兩組移植后E2濃度均較去勢后高，而FSH濃度均較去勢后低，差異有顯著性（P<0.05）；A、B兩組卵巢組

9、織移植后E2濃度顯著低于C組假手術(shù)組（P<0.05），而FSH濃度顯著高于C組（P<0.05），A、B兩組移植后E2和FSH濃度比較，差異無顯著性（P>0.05）。（4）組織學(xué)觀察：卵巢組織冷凍復(fù)蘇后，GnRH組與對照組卵巢組織比較，正常形態(tài)卵泡比例GnRH組較對照組高，差異有顯著性（P<0.05）；移植物內(nèi)卵泡比較，GnRH組與對照組正常形態(tài)卵泡比例比較無顯著性（P>0.05），正常形態(tài)卵泡比例均較移植前顯著降低（P<0.01），僅見