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文檔簡介
1、本文通過在視網(wǎng)膜新生血管模型小鼠玻璃體內(nèi)注射VEGFSiRNA的方法,探討是否能夠使用SiRNA來抑制視網(wǎng)膜新生血管的形成。 研究目的:在高氧誘導的視網(wǎng)膜新生血管模型小鼠玻璃體內(nèi)注射一定量的VEGFSiRNA,觀察: 1、玻璃體內(nèi)注射VEGFSiRNA是否能夠有效地抑制視網(wǎng)膜新生血管的生成。 2、玻璃體內(nèi)注射VEGFSiRNA是否導致了視網(wǎng)膜組織生成VEGFmRNA明顯減少。 3、玻璃體內(nèi)注射VEGFSi
2、RNA是否會對小鼠眼球的生長,發(fā)育產(chǎn)生影響以及引起其他不良反應。 研究方法:選擇出生第七天的C57BL/6小鼠,將其在75%±3的氧氣中飼養(yǎng)5天后,再回到正常空氣中進行飼養(yǎng),其余條件不變。小鼠脫氧的同時在實驗組使用微量進樣器在小鼠眼球內(nèi)注射VEGFSiRNA,分為高劑量和低劑量組;并使用轉(zhuǎn)染試劑使VEGFSiRNA轉(zhuǎn)染效率提高。對照組給予no-silenceSiRNA和轉(zhuǎn)染試劑。在脫氧后5天,觀察角膜,晶體的透明度,摘除小鼠眼球
3、稱重。取一側(cè)眼球石蠟包埋制作病理切片進行HE染色和VEGF免疫組化檢測,取另一側(cè)眼球視網(wǎng)膜組織進行RT-PCR檢測VEGFmRNA的表達水平,以觀察視網(wǎng)膜新生血管的情況和VEGFmRNA表達的情況。 研究結(jié)果: 1、玻璃體內(nèi)注射VEGFSiRNA對視網(wǎng)膜新生血管的生成影響。 HE染色和免疫組化結(jié)果和對照組相比,玻璃體內(nèi)注射VEGFSiRNA,突破內(nèi)界膜生長的血管內(nèi)皮細胞顯著減少(P<0.01)。表明新生血管生成減
4、少。高劑量和低劑量組間未見明顯差異。 2、玻璃體內(nèi)注射VEGFSiRNA對視網(wǎng)膜表達VEGFmRNA和VEGF的影響。 VEGFmRNA的A值比(吸光度比值)發(fā)現(xiàn):與對照組相比,實驗組顯著減少(P<0.01)。實驗組中,高劑量和低劑量組間未見明顯差異。表明實驗組VEGFmRNA表達比對照組明顯減少。VEGF免疫組化,內(nèi)皮細胞VEGF染色淡,VEGF染色陽性細胞比率低。與對照組相比,實驗組VEGF生成顯著減少(P<0.01
5、)。 3、玻璃體內(nèi)注射VEGFSiRNA是否會影響小鼠眼球的生長,發(fā)育以及其他不良反應。 對照組和實驗組眼球重量無顯著差異,實驗組小鼠眼球角膜,晶體透明。病理切片上未見明顯異常。 研究結(jié)論: 1、玻璃體內(nèi)注射VEGFSiRNA能抑制小鼠視網(wǎng)膜新生血管的生成。 2、玻璃體內(nèi)注射VEGFSiRNA導致了小鼠視網(wǎng)膜生成VEGFmRNA減少。 3、玻璃體內(nèi)注射VEGFSiRNA短期內(nèi)不會影響小鼠眼
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