麥門(mén)冬合千金葦莖湯抗肺癌效應(yīng)物質(zhì)基礎(chǔ)及其葦莖的化學(xué)成分研究.pdf

1、本論文課題來(lái)源于國(guó)家“十一五”科技支撐計(jì)劃：高容量分析中藥復(fù)方調(diào)控肺癌信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的系統(tǒng)生物學(xué)研究(2006BAI11808-01)。麥門(mén)冬合千金葦莖湯是名老中醫(yī)周仲瑛先生經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期臨床實(shí)踐發(fā)現(xiàn)的治療肺癌的經(jīng)驗(yàn)方，由麥門(mén)冬湯和千金葦莖方兩個(gè)經(jīng)典名方相合而成。麥門(mén)冬湯見(jiàn)于張仲景《金匱要略·肺痿肺癰咳嗽上氣病脈證治》，“火逆上氣，咽喉不利，止逆上氣者，麥門(mén)冬湯主之”，千金葦莖方出自于孫思邈《千金要方·肺癰第七》，能清肺化痰，逐瘀排膿，主治肺癰

2、?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究證實(shí)麥門(mén)冬湯和千金葦莖方具有抑制腫瘤生長(zhǎng)，提高免疫能力。本課題試圖通過(guò)麥門(mén)冬合千金葦莖湯的效應(yīng)物質(zhì)基礎(chǔ)研究，為闡明該該合方治療肺癌的科學(xué)內(nèi)涵提供依據(jù)，為方劑現(xiàn)代研究提供研究思路與方法。
　　 本論文第一部分對(duì)中藥復(fù)方在治療肺癌方面的研究進(jìn)行了綜述，并對(duì)麥門(mén)冬湯和千金葦莖方的化學(xué)成分、藥理作用以及臨床應(yīng)用等方面的研究進(jìn)行了分析歸納。
　　 本論文第二部分為實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，首先將麥門(mén)冬合千金葦莖湯進(jìn)行水提、醇沉、萃

3、取等方法得到8個(gè)化學(xué)物質(zhì)部位(MW-01～MW-08)，并采用MTT法對(duì)這些部位進(jìn)行了抗肺癌細(xì)胞A549生物效應(yīng)進(jìn)行評(píng)價(jià)。從而確定具有生物活性的部位，分別為乙酸乙酯部位和正丁醇部位，尤以乙酸乙酯部位抗肺癌效應(yīng)最好。
　　 利用硅膠柱層析和重結(jié)晶等方法從該合方乙酸乙酯部位分離得到11個(gè)化學(xué)成分，并通過(guò)理化性質(zhì)和光譜分析鑒定為對(duì)羥基苯甲酸、香豆酸、異香草酸、甘草素、異甘草素、4’-O-[2-hydroxypropanoyl-(6)-

4、D-glucopyranoside]、芒柄花素、尿嘧啶、琥珀酸、β-谷甾醇、豆甾醇。同時(shí)從正丁醇部位得到琥珀酸酐、尿嘧啶、人參皂苷Rg3、甘露醇。體外抗肺癌細(xì)胞A549實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，芒柄花素、尿嘧啶、人參皂苷Rg3、琥珀酸、β-谷甾醇具有明顯的抑制肺癌細(xì)胞A549生長(zhǎng)的作用。
　　 采用UPLC-DAD-Q-TOF-MS技術(shù)，通過(guò)與對(duì)照品比對(duì)紫外吸收光譜及質(zhì)譜數(shù)據(jù)，最終鑒定了效應(yīng)部位9個(gè)化學(xué)成分，分別為對(duì)羥基苯甲酸、對(duì)羥基苯甲醛

5、、香草酸、甘草苷、4’-O-[2-hydroxypropanoyl-(6)-D-glucopyranoside]、異甘草苷、甘草素、異甘草素和芒柄花素。采用HPLC-DAD方法同時(shí)測(cè)定了麥門(mén)冬合千金葦莖湯效應(yīng)部位中7個(gè)酚類(lèi)化學(xué)成分(對(duì)羥基苯甲酸、對(duì)羥基苯甲醛、香豆酸、香草酸、甘草苷、甘草素、異甘草素)。其色譜條件為Waters sunfire C18(250mm×4.6mm，5um)色譜柱，柱溫25℃，乙腈-0.5％醋酸水溶液為流動(dòng)相，

6、梯度洗脫，流速1.0ml/min，對(duì)羥基苯甲酸和甘草苷的檢測(cè)波長(zhǎng)為277.4nm。其余化合物檢測(cè)波長(zhǎng)為297.4nm。
　　 利用柱層析等方法從葦莖的乙醇提取物中分離得到14個(gè)化合物，通過(guò)1H-NMR、13C_NMR、2D NMR和MS等鑒定其結(jié)構(gòu)分別為：金色酰胺醇酯、阿魏酸、對(duì)香豆酸、丁香酸、2，3-dihydroxy-1-(4-hydroxy-3，5-dimethoxyphenyl)-1-propanone、異香草酸、對(duì)羥基

7、苯甲酸、對(duì)羥基苯甲醛、棕櫚酸、十七烷酸、β-谷甾醇、豆甾醇、α-D-葡萄糖和β-D-葡萄糖。對(duì)得到的各單體成分進(jìn)行抗肺癌細(xì)胞A549生物活性評(píng)價(jià)，結(jié)果表明金色酰胺醇酯和阿魏酸都有明顯的抑制肺癌細(xì)胞A549生長(zhǎng)作用。
　　 本論文的特色和創(chuàng)新點(diǎn)為：
　　 1、化學(xué)分離與藥理研究緊密結(jié)合：首先對(duì)復(fù)方及其主要藥味各分離部位進(jìn)行生物活性評(píng)價(jià)，確定其有效部位；然后對(duì)有效部位采用現(xiàn)代色譜分析技術(shù)得到化學(xué)成分，并對(duì)其進(jìn)行活性評(píng)價(jià)，從而

8、推定復(fù)方中可能的活性物質(zhì)，從而為闡明復(fù)方治療作用的效應(yīng)物質(zhì)基礎(chǔ)提供依據(jù)。
　　 2、各種先進(jìn)儀器分析方法的采用：各種現(xiàn)代色譜技術(shù)，尤其是UPLC-QTof-MS與全自動(dòng)HPLC分析系統(tǒng)為復(fù)方復(fù)雜化學(xué)物質(zhì)的分析檢識(shí)與同時(shí)多成分定量分析研究提供了強(qiáng)大可靠的技術(shù)保障。
　　 3、麥門(mén)冬合千金葦莖湯是名老中醫(yī)周仲瑛先生經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期臨床實(shí)踐發(fā)現(xiàn)具有明顯的治療肺癌作用，通過(guò)本論文的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)和生物效應(yīng)的結(jié)合研究，為創(chuàng)制防治肺癌中藥新藥