石家莊地區(qū)中老年人APOE、LDLR和ER-α基因多態(tài)性與血清膽固醇水平的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：阿爾茨海默?。ˋlzheimerdisease，AD）是以神經(jīng)細(xì)胞外Aβ蛋白聚集形成老年斑，腦神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)tau蛋白異常聚集形成神經(jīng)元纖維纏結(jié)，腦萎縮為主要病理特征的神經(jīng)退行性疾病。醫(yī)學(xué)界普遍認(rèn)為AD的發(fā)生發(fā)展受遺傳因素和環(huán)境因素等多種因素的影響。但是，AD的確切發(fā)病機(jī)制尚不清楚，也沒有十分有效的治療方法。到目前為止AD的基因遺傳學(xué)研究大約發(fā)現(xiàn)了350個基因可能與遲發(fā)性AD有相關(guān)性。在這之中APOE4等位基因已經(jīng)被醫(yī)學(xué)界認(rèn)可是AD的

2、易感基因。此外ER-α和LDLR基因的多態(tài)性也可能與AD的發(fā)生關(guān)系密切。
　　 另一方面科學(xué)界也在努力研究AD的早期診斷，這包括血清生物標(biāo)志物診斷，腦脊液生物標(biāo)志物診斷，PET，CT等等，但這些方面進(jìn)展緩慢。盡管如此，AD的血清學(xué)研究依然在發(fā)展，已有一些研究證實中年期血清總膽固醇升高是AD發(fā)病的風(fēng)險因素之一。
　　 本研究旨在利用PCR-RFLP法對石家莊社區(qū)居住的普通健康中老年人進(jìn)行AD相關(guān)基因APOE，ER-α，LD

3、LR的基因多態(tài)性分析并聯(lián)系血糖、血脂、血膽固醇，HDL-Ch，LDL-Ch，VLDL-Ch及記憶能力(MMSE)減退狀況，試分析AD相關(guān)基因的基因多態(tài)性，血中生物學(xué)標(biāo)志物水平及MMSE分?jǐn)?shù)之間的相關(guān)性，為臨床早期診斷AD高危人群和預(yù)防AD提供一些幫助。
　　 方法：
　　 1.選擇研究對象：
　　 河北省石家莊市社區(qū)內(nèi)居住的45歲以上普通健康中老年人群隨機(jī)抽樣201名志愿者。均在石家莊居住20年以上，其中男性52

4、名，女性149名。
　　 2.問卷調(diào)查：
　　 對研究對象進(jìn)行一般情況調(diào)查及簡短精神記憶量表MMSE問卷調(diào)查。
　　 3.血清生物標(biāo)志物水平測定：
　　 抽取研究對象外周靜脈血，使用試劑盒測定血清中血糖，甘油三酯，總膽固醇。使用全自動血生化分析儀測定HDL-Ch，LDL-Ch，VLDL-Ch含量。
　　 4.模板DNA的提取及鑒定：
　　 抽取研究對象外周靜脈血，采用葡聚糖沉淀法從全血白細(xì)

5、胞中提取模板DNA。測定模板DNA的OD260與OD280分析濃度與純度，OD260/OD280大約在1.8到1.9范圍內(nèi)，為高質(zhì)量DNA模板。
　　 5.目的基因的PCR擴(kuò)增與多態(tài)性分析：
　　 參照文獻(xiàn)分別設(shè)計APOE基因，ER-α基因，LDLR基因的引物并進(jìn)行PCR擴(kuò)增。利用多聚酶鏈反應(yīng)限制性內(nèi)切酶片段長度多態(tài)性(PCR-RLFP)分析技術(shù)分別分析APOE基因的HhaⅠ多態(tài)性，LDLR基因的AvaⅡ多態(tài)性，ER-α

6、基因的XbaⅠ及PvuⅡ多態(tài)性。
　　 6.統(tǒng)計：
　　 使用SPSS17.0軟件采用非參數(shù)檢驗(nonparametrictest)分析各基因的多態(tài)性與血清學(xué)生物學(xué)標(biāo)志物水平及MMSE分?jǐn)?shù)的相關(guān)性。數(shù)據(jù)用M(QR)表示。
　　 結(jié)果：
　　 1.APOE基因多態(tài)性與血清生物學(xué)指標(biāo)相關(guān)性研究時發(fā)現(xiàn)：60歲以上男性亞組中APOE基因E3等位基因組血清總膽固醇水平高于E2等位基因組(P=0.018)及E3/E

7、3基因型血清總膽固醇水平高于E2/E3基因型(p=0.041)；全年齡，全性別亞組中APOE基因E2等位基因血清VLDL-Ch水平高于E3等位基因(p=0.029)及E2/E3基因型VLDL-Ch水平高于E3/E3基因型(p=0.044)。
　　 2.LDLR基因多態(tài)性與血清生物學(xué)指標(biāo)相關(guān)性研究時發(fā)現(xiàn)：60歲以上全性別亞組中LDLR基因aa基因型LDL-Ch水平高于Aa基因型(p=0.034)。LDLR基因多態(tài)性與MMSE分?jǐn)?shù)相

8、關(guān)性研究時發(fā)現(xiàn)：60歲以上全性別亞組中Aa基因型MMSE分?jǐn)?shù)高于aa型(p=0.028)及A等位基因MMSE分?jǐn)?shù)高于a等位基因(P=0.014＜0.05)。
　　 3.ER-α基因多態(tài)性與血清生物學(xué)指標(biāo)相關(guān)性研究時發(fā)現(xiàn)：60歲以下女性亞組中ER-α基因(XbaⅠ)x等位基因血清甘油三酯水平高于X等位基因(p=0.027);60歲以下全性別亞組中ER-α基因(PvuⅡ)p等位基因LDL-Ch水平高于P等位基因(P=0.048)；6