COX-2shRNA對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞Atf3、Serpinb2、Pgk1、Thra基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　研究靶向COX-2shRNA對(duì)大鼠HSC-T6 COX-2的抑制作用，觀察Atf3、Serpinb2、Pgk1、Thra基因表達(dá)的影響，進(jìn)一步探討COX-2shRNA抑制HSC增殖的作用機(jī)制。
　　方法：
　　實(shí)驗(yàn)將HSC-T6分為三組，空白對(duì)照組（以PBS液替代質(zhì)粒），空載體組（未插入目的基因的DNA片段，HK質(zhì)粒組）及轉(zhuǎn)染組（pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2 shRNA1組），利用Lipof

2、ectamineTM2000將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入大鼠肝星狀細(xì)胞，在熒光顯微鏡下觀察其轉(zhuǎn)染效率，然后提取轉(zhuǎn)染后24h，48h，72h各組細(xì)胞中RNA，應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)各組各時(shí)間段COX-2、Atf3、Serpinb2、Pgk1、Thra基因表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1、熒光顯微鏡下觀察結(jié)果：COX-2 shRNA1轉(zhuǎn)染大鼠肝星狀細(xì)胞后24h、48h、72h，熒光顯微鏡下觀察，轉(zhuǎn)染成功的細(xì)胞質(zhì)中可見(jiàn)綠色的熒光，轉(zhuǎn)染效率均可達(dá)7

3、0％以上，空白組與空載體組細(xì)胞質(zhì)中未見(jiàn)綠色熒光。
　　2、轉(zhuǎn)染后COX-2表達(dá)的影響：應(yīng)用RT-PCR方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后24h、48h、72h轉(zhuǎn)染組 COX-2 mRNA的表達(dá)都低于空白對(duì)照組和空載體組（P<0.05），其中以72h抑制最為明顯，空白對(duì)照組和空載體組無(wú)沉默效應(yīng)。
　　3、轉(zhuǎn)染后Atf3、Serpinb2、Thra表達(dá)的影響：應(yīng)用RT-PCR方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后24h、48h、72h轉(zhuǎn)染組Atf3、Serpinb2 mR

4、NA的表達(dá)都低于空白對(duì)照組和空載體組（P<0.05），其中以72h抑制最為明顯，空白對(duì)照組和空載體組無(wú)沉默效應(yīng)。
　　4、轉(zhuǎn)染后Pgk1表達(dá)的影響：應(yīng)用RT-PCR方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后24h轉(zhuǎn)染組Pgk1 mRNA的表達(dá)與空白對(duì)照組和空載體組之間無(wú)差異（P﹥0.05），48h、72h低于空白對(duì)照組和空載體組（P<0.05），以72h抑制最為明顯，空白對(duì)照組和空載體組無(wú)沉默效應(yīng)。
　　結(jié)論：
　　1.靶向COX-2