納米二氧化硅-（聚）甲基丙烯酸甲酯義齒基托復(fù)合材料生物安全性實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：納米二氧化硅/(聚)甲基丙烯酸甲酯義齒基托復(fù)合材料生物安全性的臨床前評價。 方法：根據(jù)ISO7405-1997“牙科學(xué)—用于牙科的醫(yī)療器械生物相容性臨床前評價—牙科材料實(shí)驗(yàn)方法”國際標(biāo)準(zhǔn)，對該材料進(jìn)行了細(xì)胞毒性試驗(yàn)、溶血試驗(yàn)、急性系統(tǒng)性毒性試驗(yàn)、口腔粘膜刺激試驗(yàn)、皮膚致敏試驗(yàn)和骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)。 1.細(xì)胞毒性試驗(yàn)：采用Verocell(非洲綠猴腎細(xì)胞，CCL81)體外培養(yǎng)的四唑鹽比色實(shí)驗(yàn)和材料浸提液培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)

2、觀察法。 2.溶血試驗(yàn)：材料樣品的生理鹽水浸提液加稀釋兔血0.2ml，離心5min，吸取上清液移入比色皿內(nèi)，測定各管吸光度。 3.急性經(jīng)口系統(tǒng)性毒性試驗(yàn)：用材料樣品的生理鹽水浸提液以15000mg/kg的劑量給昆明種小鼠灌胃，灌胃后一周內(nèi)觀察小鼠一般狀態(tài)及毒性表現(xiàn)和死亡數(shù)。 4.口腔粘膜刺激試驗(yàn)：將材料圓片用眼科針線縫合固定在健康倉鼠兩側(cè)頰囊，縫合固定后觀察兩周，觀察動物全身反應(yīng)，接觸局部的粘膜反應(yīng)，兩周后處死動

3、物，局部粘膜作組織切片，HE染色，觀察粘膜的組織細(xì)胞反應(yīng)。 5.皮膚致敏試驗(yàn)：選白色雄性健康豚鼠，分別用陽性對照為10％二硝基氯苯，陰性對照為生理鹽水，材料樣品的生理鹽水浸提液，完全弗氏佐劑(FCA)及完全弗氏佐劑和受試物的乳化劑進(jìn)行誘導(dǎo)接觸，激發(fā)接觸，在24h，48h觀察激發(fā)接觸結(jié)果。 6.微核試驗(yàn)：選用健康昆明種小白鼠設(shè)高、中、低三個劑量組，分別按15.0g/kg、7.5g/kg、3.75g/kg的比例用材料混懸液灌

4、胃；陽性對照為40mg/kg的環(huán)磷酰胺，用腹腔注射；陰性對照為生理鹽水灌胃。第一次染毒后24小時再次染毒，末次染毒后6h處死動物，制取胸骨骨髓推片，固定，Giemsa染色，觀察嗜多染紅細(xì)胞(PCE)，每只小鼠計數(shù)1000個，觀察微核的數(shù)。 結(jié)果：體內(nèi)外的生物學(xué)試驗(yàn)結(jié)果表明：該材料無明顯細(xì)胞毒性、溶血性，無急性系統(tǒng)性毒性反應(yīng)、皮膚致敏性、口腔粘膜刺激性和致突變性。 1.細(xì)胞毒性試驗(yàn)：納米基托樹脂、普通基托樹脂與陰性對照在試

5、驗(yàn)中的吸光度值無顯著性差異(P＞0.05)；毒性均為1級；倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)未見改變。 2.溶血試驗(yàn)：材料樣品的溶血率小于5％，參照ISO/TR7405-1984(E)規(guī)定，溶血試驗(yàn)合格。 3.急性經(jīng)口系統(tǒng)性毒性試驗(yàn)：一周觀察期內(nèi)，動物未見中毒癥狀和不良反應(yīng)，亦無死亡，LD50＞15000mg/kg，根據(jù)急性毒性分級標(biāo)準(zhǔn)，受試物樣品混懸液屬實(shí)際無毒。 4.口腔粘膜刺激試驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)觀察：通過兩周的觀察發(fā)現(xiàn)，動

6、物活動、飲食正常；局部粘膜無異常反應(yīng)，如充血、出血、糜爛、潰瘍等，與陰性對照組無明顯差異。組織切片：兩種材料組織切片均顯示上皮連續(xù)性完好，細(xì)胞層次清楚，排列均勻。皮下組織疏松，腺體形態(tài)規(guī)則，細(xì)胞排列整齊，結(jié)締組織中無炎癥細(xì)胞浸潤，與陰性對照牙膠組的組織切片無明顯差異。 5.皮膚致敏試驗(yàn)：激發(fā)接觸后注射受試物樣品的各點(diǎn)及陰性對照的各點(diǎn)皮膚無不良的變化；陽性對照的各點(diǎn)激發(fā)后24h皮膚水腫顯著，紅斑中度或重度，后期糜爛、節(jié)痂。根據(jù)致敏