5’-甲基硫代腺苷對結腸癌細胞凋亡的影響及其相關機制的研究.pdf

1、結直腸癌是消化系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一。臨床上就診的大部分患者屬于中、晚期結腸癌，預后差。研發(fā)新的有效安全的化學防治藥物是目前結腸癌等消化道腫瘤防治方面需要迫切解決的問題。5'-甲基硫代腺(5'-methylthioadenosine，MTA)是多胺和蛋氨酸代謝過程中的代謝產(chǎn)物，其代謝前體是S-腺苷蛋氨酸。cFLIP[celluarFas-associateddeathdomain-likeinterleukin-1b-corlvert

2、ingenzyme(FLICE)-likeinhibitoryprotein]基因為一抑制細胞凋亡的基因。本課題研究MTA對體外培養(yǎng)的正常結腸上皮NCM460細胞系及結腸癌RK0系和Hct116細胞系增殖及凋亡的影響，并研究cFLIP基因在MTA誘導結腸癌RK0和Hct116細胞系凋亡過程中的作用。 第一部分MTA對結腸癌細胞增殖和凋亡的影響 目的：研究MTA對結腸癌細胞增殖和凋亡的影響。 方法：1)采用四甲基偶

3、氮唑藍(MTT)比色的方法，研究不同濃度MTA對正常結腸上皮NCM460細胞系及結腸癌RKO細胞系和Hct116細胞系的增殖抑制作用。 2)采用Hoechst33258染色的方法，研究不同濃度MTA對正常結腸上皮NCM460細胞及結腸癌RKO細胞系和Hct116細胞系的細胞凋亡的誘導作用。 3)采用AnnexinV-FITC染色的方法，比較MTA、5-氟尿嘧啶、TRAIL對結腸癌RKO細胞系凋亡的影響。 結果：1

4、)MTA對NCM460細胞系、Hct116細胞系和RK0細胞系均可產(chǎn)生增殖抑制作用，且這種抑制作用存在劑量依賴關系。同一濃度下MTA對Hct116細胞系及RK0細胞系增殖的抑制作用均明顯強于對NCM460系的增殖抑制作用。 2)MTA對NCM460細胞系、Hct116細胞系和RK0細胞系均可產(chǎn)生細胞凋亡誘導作用，且這種誘導作用存在劑量依賴關系。同一濃度下MTA對Hct116細胞系及RK0細胞系凋亡誘導作用均明顯強于對NCM460

5、系的凋亡誘導作用。 3)MTA、TRAIL、5-氟尿嘧啶均可以對RK0細胞系產(chǎn)生細胞凋亡的誘導作用，MTA或5-氟尿嘧啶與TRAIL聯(lián)合作用均可增強誘導RK0細胞系凋亡的作用。 結論：1)MTA可以對結腸癌Hct116細胞系及RK0細胞系產(chǎn)生明顯的抑制增殖和誘導細胞凋亡的作用，該作用明顯強于MTA對正常結腸上皮細胞NCM460系的作用。 2)MTA、5-氟尿嘧啶均可以與TRAIL產(chǎn)生誘導RK0細胞系凋亡的協(xié)同作用

6、。 第二部分cFLIP基因在MTA誘導結腸癌RK0、Hct116細胞系凋亡過程中作用的研究 目的：探討cFLIP基因在MTA誘導結腸癌RK0、Hct116細胞系凋亡過程中作用。 方法：1)采用realtime-PCR技術，在mRNA水平研究cFLIP基因在MTA誘導結腸癌RK0、Hct116細胞凋亡過程中的表達。 2)采用WesternBlot技術，在蛋白水平研究cFLIP基因及其下游活性Caspase-

7、8蛋白在MTA誘導結腸癌RKO細胞凋亡過程中的表達情況。 3)采用基因轉染技術，分析cFLIp基因過度表達后，MTA誘導結腸癌RK0細胞凋亡誘導作用。 結果：1)MTA作用于結腸癌RK0、Hct116細胞4-16小時之間可以明顯的引起cFLIP基因在mRNA水平的明顯下調(diào)。 2)MTA作用于結腸癌RKO細胞6-16小時之間可以明顯的引起cFLIP蛋白的明顯下調(diào)，并可以引起其下游活性Caspase-8蛋白的上調(diào)。