椪柑多倍體的分離以及臍橙品種的遺傳多樣性分析.pdf

1、體細胞突變是柑橘等果樹比較常見的生物學(xué)現(xiàn)象，也是品種選育，即芽變選種的主要變異來源。針對柑橘芽變品種較多，識別比較困難，遺傳標(biāo)記差異小等困難，本文采用MSAP(甲基化敏感擴增多態(tài)性)等標(biāo)記技術(shù)，對世界主要的甜橙類型臍橙不同品種進行分析，研究其遺傳多樣性；同時，利用體細胞的倍性變異以及柑橘具有珠心胚現(xiàn)象的特點，針對椏柑種子多的問題，從椏柑種子離體播種實生苗中分離得到四倍體，為培育三倍體無核類型，改良種子多的性狀提供了材料。主要結(jié)果如下：

2、 1、通過組培方法培育椏柑多胚苗，從374粒種子中培養(yǎng)得到449株小苗，利用流式細胞儀和染色體記數(shù)方法篩選出7株四倍體植株。對獲得的7株 四倍體植株進行SSR分析，表明這7株四倍體均來自珠心細胞，為體細胞自然 加倍得到的同源四倍體。這些同源四倍體植株表現(xiàn)出葉片比二倍體大，葉片鮮樣的葉綠素a和類胡蘿卜素含量則比二倍體低。結(jié)合RAPD、SSR、AFLP分析研究椏柑體細胞加倍發(fā)生的變異情況，RAPD、SSR分析沒有檢測到變異的發(fā)生，

3、說明加倍過程很少發(fā)生重組。AFLP檢測到其中一株四倍體有一條特征帶，這可能是椏柑體細胞發(fā)生加倍時，核苷酸堿基序列發(fā)生改變，或是同源四倍體的等位基因發(fā)生漂移。 2、應(yīng)用RAPD、SSR、AFLP、SRAP、IRAP分子標(biāo)記研究臍橙24個品種的多態(tài)性，RAPD、SSR、IRAP均沒有鑒別出臍橙品種之間的遺傳差異；AFLP的檢測效率也很低，130對引物中僅5對顯示品種問的多態(tài)性，鑒別出了四個臍橙品種；而36對SRAP引物中也只有一對顯

4、示朋娜有一條帶缺失。 3、8個Mse I／Pst I(M／P)引物對和8個EcoR I／HpaII、EcoRI／Msp I(E／H+M)引物對分別得到36個和43個多態(tài)性標(biāo)記，M／P引物對和E／t{+M引物對得出的平均多態(tài)性比率(Pi)為7.56％和15.19％，平均多態(tài)性信息含量分別為0.086和0.249，標(biāo)記指數(shù)分別為0.387和1.070。E／H+M引物對的效率高于M／P引物對的效率。130個EcoR I／Mse I(E

5、／M)引物對，有5對引物顯示有多態(tài)性。這5對引物擴增得到318條帶，其中有11條多態(tài)帶，平均多態(tài)率為3．46％，平均多態(tài)性信息含量(PIC)和標(biāo)記指數(shù)(MI)分別為0.085和0.187，比E／l/H+M和M／P的都要低，表明E／M引物對的效率比E／H+M和M／P引物對的效率要低很 多。 4、利用MSAP(甲基化敏感擴增多態(tài)性)技術(shù)對24個臍橙品種胞嘧啶甲基化模式和程度進行評估，結(jié)果發(fā)現(xiàn)DNA甲基化在臍橙中發(fā)生頻繁，在臍橙基因

6、組CCGG序列和CTGCAG序列中均有胞嘧啶甲基化現(xiàn)象發(fā)生，在CCGG序列中檢測到4.7％～15.0％的DNA發(fā)生甲基化。MSAP技術(shù)能有效的鑒別臍橙品種，18對擴增引物有10對顯示有多態(tài)性，總共得到639條帶，其中43條帶為甲基化多態(tài)性帶，平均甲基化多態(tài)性(P)比率達6.7％，且品種之間的甲基化模式存在較大差異，臍橙CCGG序列中外部胞嘧啶甲基化(15.0％)多于內(nèi)部(4.7％)胞嘧啶甲基化。 5、對MSAP分析得到的12個差