視網膜母細胞瘤的臨床化療與誘導分化研究.pdf

1、視網膜母細胞瘤(Rb)是小兒最常見的眼內惡性腫瘤，隨著早期診斷、早期治療及治療方法的不斷改進，其生存率目前在美國達95％，在世界范圍約為50％。手術摘除眼球雖然較為安全，但創(chuàng)傷較大，降低了患者的生存質量。外放射是一種有效的治療方法，但因其可產生嚴重的并發(fā)癥，現(xiàn)在已不作為首選治療。藥物治療始終是一個焦點，在發(fā)達國家化學減容療法治療眼內期視網膜母細胞瘤取得顯著成績，對有復發(fā)和轉移高危因素的患者術后輔助化療提高了患者的生存率，對顱內蔓延和遠處

2、轉移患者的治療不斷改進。但傳統(tǒng)化療仍存在很多不足，如藥物對正常組織細胞的殺傷；反復用藥后產生耐藥性等。因此在尋找新藥的同時，還要尋找藥物治療的新途徑。 腫瘤分化治療與傳統(tǒng)化療不同，它是通過分化劑的誘導使畸形分化的腫瘤細胞向正常表型細胞的終末方向分化，抑制其增殖，分化治療在白血病的治療中已顯示出巨大潛力。實驗數(shù)據表明，分化劑可同樣抑制實體腫瘤細胞的增殖并促使其向正常細胞轉化。Rb起源于視網膜多能干細胞，在分化劑的誘導下可向多個正常

3、細胞表型分化。但細胞的分化受多種因素調控，Hedgehog信號通路是在動物胚胎發(fā)育過程中起重要作用的信號通路之一，尤其在視網膜細胞分化中起重要作用。已證實多種腫瘤的發(fā)生與Hedgehog信號通路的異常有密切關系，該通路的抑制劑cyclopamine對某些腫瘤的生長產生明顯的抑制作用甚至使腫瘤消失。因此本研究擬探討視網膜母細胞瘤的誘導分化及Hedgehog信號通路各成份的表達，為進一步研究視網膜母細胞瘤的靶向治療打下基礎。 第一部

4、分藥物治療視網膜母細胞瘤的臨床病例分析 目的：探討化療對患者生存及預后的影響及觀察化學減容療法對眼內期視網膜母細胞瘤的療效。 方法：收集1997～2004年于中山眼科中心診治的268例Rb患者資料，隨訪了135例，其中男80例，女55例；單眼107例，雙眼28例。分析這些患者的一般狀況、治療情況及其對生存的影響、腫瘤的病理侵襲范圍及其對生存的影響、生存與死亡情況。 對行化學減容治療眼內期Rb的14例患者15只眼進

5、行隨訪觀察，其中男8例，女6例；單側1例，雙側13例。分析患者的一般狀況、腫瘤特征、治療前后腫瘤的變化、預后情況。 用SPSS13.0軟件包進行統(tǒng)計學分析。結果：Rb患者1、2、3、4、5年的生存率分別為84％、83％、83％、81％、81％。眼外期患者中化療組生存率明顯高于未經化療組，兩者間有統(tǒng)計學差異(P=0.000)。視神經、脈絡膜、鞏膜、前房是否受累的生存率間分別有統(tǒng)計學差異(P值均＜0.05)，但視神經合并脈絡膜受累并

6、沒有進一步降低視神經受累的生存率(P=0.181)。視神經、脈絡膜、鞏膜、前房受累、化療及植入義眼座對死亡風險的危險比分別為4.881，1.147，3.007，1.550，0.051，0.136。 化學減容前眼內腫瘤基底最大直徑平均為10.27mm(5.61～18.8mm)，最大厚度平均為6.29mm(1.77～11.28mm)；治療結束后分別為4.77mm(1.5～7.25mm)、2.47mm(1.41～5mm，2例厚度不祥)

7、，比化療前分別減少了53.6％(-0.2％～60.1％)、50.6％(28.6％～83.2％)?；瘜W減容療法總有效率為46.7％，無效率為53.3％，眼球保留率為40％。多數(shù)患者可耐受化療，無嚴重并發(fā)癥發(fā)生。 結論：影響患者預后的病理高危因素依次為視神經、鞏膜、前房、脈絡膜受累。術后輔助化療提高了有復發(fā)和轉移高危因素的視網膜母細胞瘤患者的生存和預后?；瘜W減容療法對眼內期視網膜母細胞瘤有一定療效，是一種有潛力的保守治療方法。

8、 第二部分視網膜母細胞瘤的體外分化研究 目的：觀察全反式維甲酸(ATRA)對視網膜母細胞瘤S0—Rb50細胞生長的抑制作用及S0—Rb50細胞向正常細胞表型分化的情況。 方法：用0、10-7、10-6、10-5M的ATRA作用于S0—Rb50細胞，繪制生長曲線；MTT法檢測ATRA的IC50值；10-5M的ATRA作用于細胞，用流式細胞儀測定用藥前及用藥后1、2、3、7天的細胞周期；觀察用藥前及用藥后20天活體細胞和H

9、E染色細胞形態(tài)；免疫組化法檢測用藥前及用藥后20天NSE、Vimentin、GFAP的表達情況。 結果：0、10-7、10-6、10-5M的ATRA作用于SO—Rb50細胞后細胞生長曲線逐漸變得低平；ATRA作用于細胞的IC50值約為10-5M；用10-5M的ATRA作用后，GO/G1期細胞從用藥前的56.5％升至用藥后的66.6％～81.0％，S期細胞則從33.1％降至22.3％～15.9％，用藥后48小時作用達高峰。細胞在包

10、被0.25％多聚賴氨酸溶液的載玻片上可貼壁生長，用藥后細胞生長集落明顯減小，20天后部分細胞呈橢圓形或梭形，核漿比值減小，并伸出細長或較短的突起；用藥前NSE染色中等陽性，Vimentin染色強陽性，GFAP染色陰性；用藥20天后NSE與Vimentin染色呈強陽性，GFAP染色呈中等陽性。 結論：ATRA對S0—Rb50細胞的生長有明顯抑制作用，使細胞停滯于細胞周期的GO/G1期。ATRA對Eb細胞有誘導分化作用并促使細胞向神

11、經元和膠質細胞方向分化。 第三部分視網膜母細胞瘤中Hedgehog通路相關信號因子的表達 目的：探討SHH信號因子在Rb發(fā)生發(fā)展過程中的作用，尋找治療Rb的更特異性的靶向治療途徑。 方法：選取2004年4月～2004年8月因視網膜母細胞瘤于我院行患眼摘除的17例患兒中的8例含較多活性腫瘤組織的標本。男性5例，女性3例；雙眼1例，單眼7例。用RT一PCR方法檢測Hedgehog信號通路相關因子SHH、PTC、SMO

12、、GLI1蛋白基因在Rb細胞中的表達情況。 結果：8份標本中4份表達SHH，3份表達PTC，5份表達SMO，4份表達GLI1。表達產物分別為233bp、144bp、140bp、412bp。陽性標本外觀上均呈灰白色半透明膠狀，幾乎無鈣化灶。病理上7例為眼內期，1例為眼外期。 結論：SHH信號通路的異常活化可能參與了Rb的發(fā)生，在抑制Rb細胞分化、維持Eb細胞活性、促進Rb發(fā)展中有一定的作用。抑制SHH信號通路的異?；罨赡?/p>