活體共焦顯微鏡下正常人瞼結(jié)膜及瞼板腺的年齡變化及性別差異.pdf

1、近年來,干眼的患病率逐漸上升,已成為眼科常見疾病之一,相關(guān)研究是目前眼科研究的熱點(diǎn)之一。其中,瞼板腺(Meibomianglands,MGs)功能障礙所致蒸發(fā)過強(qiáng)型干眼占有較大比例。瞼板腺分泌多種脂質(zhì)成分,構(gòu)成淚膜的脂質(zhì)層,影響淚液蒸發(fā)及淚膜的穩(wěn)定性,因此,瞼板腺的數(shù)量及形態(tài)的變化對維持穩(wěn)定的眼表至關(guān)重要。既往研究對瞼板腺的觀察主要為病理學(xué)研究及動物實(shí)驗(yàn),目前尚無涉及正常人群的瞼板腺和瞼結(jié)膜變化的研究報(bào)道;正常人活體狀態(tài)下瞼板腺的形態(tài)及

2、密度是否受到性別差異、年齡變化、激素水平及生活環(huán)境等內(nèi)外因素的影響而發(fā)生改變,也尚不清楚。近年來問世的激光活體共焦顯微鏡為動態(tài)觀察眼表組織在活體狀態(tài)下的情況提供了有力工具。本研究通過激光活體共焦顯微鏡(LaserConfocalmicroscopy,LSCM)觀察四個(gè)年齡段組正常人群瞼結(jié)膜及瞼板腺的組織結(jié)構(gòu),探討瞼結(jié)膜上皮細(xì)胞(PalpebralCpnjunctivaepithelialcells)、杯狀細(xì)胞(Gobletcells,G

3、Cs)、樹突狀細(xì)胞(Dendriticcells,DCs)及瞼板腺腺泡細(xì)胞的密度和形態(tài),并探討其與年齡和性別的相關(guān)性。
　　第一部分
　　活體共焦顯微鏡下正常人瞼結(jié)膜及瞼板腺的年齡變化
　　目的:應(yīng)用活體LSCM觀察正常人瞼結(jié)膜及瞼板腺組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)的年齡變化。
　　方法:選擇正常人86例86只眼,按年齡進(jìn)行分組,A組為0～20歲,B組為21～40歲、C組為41～60歲、D組為61歲以上,每組約20例。翻轉(zhuǎn)上瞼,距

4、瞼緣約5mm使用LSCM觀察瞼結(jié)膜及瞼板腺組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)并記錄圖像,計(jì)算結(jié)膜上皮細(xì)胞、GCs、Des、MGs腺泡細(xì)胞密度及MGs腺泡的直徑并進(jìn)行方差分析,若有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義再行最小顯著性差異(Leastsignficantdifference,LsD)檢驗(yàn)。評價(jià)瞼結(jié)膜及MGs組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)的年齡變化。
　　結(jié)果:(1)在共焦顯微鏡下,可見瞼結(jié)膜上皮淺表層細(xì)胞的胞體較大、胞質(zhì)低反光、周邊高反光,排列松散,細(xì)胞邊界模糊、高反光,形態(tài)似圓形、卵

5、圓形。上皮的形態(tài)與其正常生理代謝過程關(guān)系密切,形態(tài)越扁平,而積越大,則越接近上皮表層。瞼結(jié)膜基底層在共焦顯微鏡下表現(xiàn)為周邊邊界高亮而清晰的近圓形、卵圓形細(xì)胞,細(xì)胞質(zhì)呈低反光。由于基底層較貼近瞼板腺且邊界較清晰,因此我們統(tǒng)計(jì)瞼結(jié)膜上皮細(xì)胞基底層細(xì)胞的密度,在A、B、C、D各組的平均密度分別為5357±304,4917±413,4925±521,4943±484(個(gè)/mm2);使用方差分析,組間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p=0.002,F=5.217

6、),但未隨年齡增長而降低。(2)GCs是淚膜黏液層的主要來源,對于維持淚膜穩(wěn)定性起重要作用。GCs胞體較大、胞內(nèi)充滿透亮顆粒、成團(tuán)或散在分布的卵圓形或圓形細(xì)胞,體積為周圍的上皮細(xì)胞的約3倍,四組中GCs密度分別為1422±590,1409±711,791±457,779±546(個(gè)/mm2),用方差分析,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.000,F=14.168);(3)DC是目前所指的機(jī)體內(nèi)功能最強(qiáng)的抗原提呈細(xì)胞,在共焦顯微鏡下形態(tài)呈胞體小

7、,呈高亮反光,散在分布,可為缺乏或長形或鐵絲網(wǎng)狀的樹突狀形態(tài)。各組平均的DCs細(xì)胞密度為29±15,30±12,41±23,36±15(個(gè)/mm2),采用方差分析,未見明顯的年齡相關(guān)變化(p=0.06,F=2.573)。(4)MGs腺泡細(xì)胞因光學(xué)切面不同,呈現(xiàn)不同形態(tài),腺泡外圈為輪胎樣上皮細(xì)胞,伴有高亮反光顆粒,胞腔內(nèi)呈灰色偶伴點(diǎn)狀高反光分泌物,團(tuán)狀聚集分布,排列不規(guī)則。A～D組細(xì)胞密度分別為92±26,86±27,62±20,56±1

8、6(個(gè)/mm2),運(yùn)用方差分析,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.000,13.133)。MG腺泡單位的直徑,A～D組分別為99.06±16.64,98.22±18.77,85.91±15.55,88.26±16.71(μm),使用方差分析,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.022,F=3.385),但未隨著年齡而明顯縮小。
　　結(jié)論:LSCM可清晰觀察正常人群瞼結(jié)膜和瞼板腺的微觀組織結(jié)構(gòu)。瞼結(jié)膜上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)及DC密度無明顯年齡改變;GCs及MG

9、腺泡細(xì)胞密度及DC分支形態(tài)隨年齡增長有退化趨勢,提示瞼板腺功能降低。
　　第二部分
　　活體共焦顯微鏡下正常人瞼結(jié)膜及瞼板腺的性別差異
　　目的:應(yīng)用活體LSCM觀察正常人瞼板腺瞼結(jié)膜及瞼板腺組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)的性別差異。
　　方法:選擇正常人86例86只眼,按性別、40歲上下進(jìn)行分組,A組為男性、年齡0～40歲,B組為女性、年齡0～40歲,C組為男性、年齡41歲以上、D組為女性、年齡41歲以上,每組約20例。翻轉(zhuǎn)上瞼

10、,距瞼緣約5mm使用LSCM觀察瞼結(jié)膜及瞼板腺組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)并記錄圖像,計(jì)算結(jié)膜上皮細(xì)胞、杯狀細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、瞼板腺腺泡細(xì)胞密度及瞼板腺腺泡的直徑并進(jìn)行t檢驗(yàn),評價(jià)瞼結(jié)膜及瞼板腺組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)的性別差異。
　　結(jié)果:(1)瞼結(jié)膜上皮細(xì)胞,在LSCM下,A、B、C、D各組的基底層細(xì)胞平均密度分別為5162±324,5042±608,4902+374,5047+345(個(gè)/mm2);使用t檢驗(yàn),40歲以下(p=0.469,t=0.827

11、)及41歲以上(p=0.607,t=1.295)組間不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(2)GCs,于四組中密度分別為1406±496,1426±367,840±375,744±307(個(gè)/mm2),使用t檢驗(yàn),不論40歲以下(p=0.288,t=-0.135)及41歲以上(p=0.406,t=0.801)皆未發(fā)現(xiàn)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(3)DCs各組平均的Dc密度為28±12,30±13,46±20,34±18(個(gè)/mm2),使用t檢驗(yàn),40歲以下(p=0

12、.551,t=-0.310)及41歲以上(p=0.149,t=2.010)未見明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(4)MG腺泡細(xì)胞,A～D組細(xì)胞密度分別為86±26,95±24,59±17,58+19(個(gè)/mm2),使用t檢驗(yàn),40歲以下(p=0.566,t=-1.130)及41歲以上(p=0.550,t=0.285)未見明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。MGs腺泡單位的直徑,A～D組分別為96.30+14.98,99.54±19.45,92.72±16.79,84.