結直腸癌病人HLA、MICA基因頻率分布及血清sMICA表達水平研究.pdf

1、目的：探討sMICA在結直腸癌患者血清中的表達及臨床意義。研究結直腸癌患者血清sMICA與臨床病理學及實驗室檢測指標的關聯(lián)性。對比分析結直腸癌患者術前術后血清sMICA的變化，初步探討手術對結直腸癌患者血清sMICA蛋白的影響及脫落機制。分析106例結直腸癌患者的HLA、MICA的基因頻率分布，初步探討人類白細胞抗原（HLA）、主要組織相容性復合體I類鏈相關蛋白A（MICA）基因遺傳免疫因素與廣東地區(qū)結直腸癌的相關性。基因測序鑒別新等位

2、基因HLA-A*33:03:01。
　　方法：第一部分:選擇2011-12/2013-12在廣州市第一人民醫(yī)院胰脾外科行手術切除、病理證實為結直腸癌患者48例，其中男37例，女11例：年齡35-82歲，中位數(shù)59歲，另取同時期在本院體檢的51例非結直腸癌的正常人作為對照組，其中男36例，女23例；年齡25-79歲，中位數(shù)56歲。患者均簽署知情同意書，符合醫(yī)學倫理學規(guī)定，分別于患者入院第一天、術后第三天，第一次回院化療前一天抽取外周

3、血。采取ELISA檢測血清sMICA蛋白，放射免疫法（RIA）定量檢測CEA、CA19-9。觀察sMICA蛋白水平與臨床病理學參數(shù)及CEA、CA19-9等腫瘤指標的關系.數(shù)據(jù)表示方法為M（Q25、Q75），應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對實驗結果進行統(tǒng)計分析。第二部分:選擇106名被確診為結直腸癌患者和118名健康獻血者采用直接測序法進行HLA及MICA基因高分辨分型。其中結直腸患者組中男性78例，女性28例，年齡33～78歲，平均年齡(

4、56.15±25)歲：健康獻血者組中年齡18～49歲，各項體檢指標均正常。應用PyPopWin32統(tǒng)計HLA及MICA各等位基因頻率的分布， HLA-MICA基因與腫瘤的免疫遺傳關聯(lián)分析采用SPSS16.0和Helixtree軟件分析
　　血清sMICA與實驗室檢測指標（CEA、CA19-9）相關性采用Spearman秩相關性分析，臨床病理參數(shù)多組樣本間sMICA、CEA、CA19-9的比較采用Kruska-Wallis檢驗，兩組

5、樣本比較采用Wilcoxon秩和檢驗。患者術前、術后血清sMICA蛋白比較采取配對的Wilicon秩和檢驗。結直腸癌患者與對照組血清sMICA蛋白的比較采用兩樣本獨立的秩和檢驗。手術組之間的轉陰率比較用卡方檢驗。
　　結果：1、結直腸癌患者術前血清sMICA水平中位數(shù)0.85(0.13,2.17) ng/ml，明顯高于正常對照組的0.39(0.02，1.29)ng/ml，差異有統(tǒng)計學意義（Z=2.118，P＜0.05）。
　

6、　2、結直腸癌患者術后回院化療時血清sMICA水平中位數(shù)明顯低于手術前及術后三天的血清sMICA中位數(shù)：術后第三天血清sMICA水平與術前血清sMICA差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，
　　3、血清sMICA水平與臨床病理參數(shù)分析提示，血清sMICA的水平與患者的年齡、性別、腫瘤的部位、病理類型、出現(xiàn)癥狀的時間無密切關系：而與腫瘤的Ducks分期、浸潤程度、組織學分化、淋巴結及遠處轉移、體重減輕、腫瘤大小有關。C、D期結直腸癌患

7、者血清的sMICA水平明顯高于A、B期（Z=-1.763， P＜0.05）；有淋巴結及遠處轉移的患者血清的sMICA水平明顯高于無淋巴結轉移的（H=22.378、Z=-1.879，P＜0.05）；腫瘤直徑大于4.0cm者血清的sMICA水平明顯高于腫瘤直徑小于4.0cm（Z=-2.183,P＜0.05）：隨著腫瘤細胞的高、中、低分化程度不同，患者的血清sMICA蛋白水平依次增高（H=22.87， P＜0.05）。
　　4、結直腸癌

8、患者血清的sMICA水平與CA19-9成正相關（r=0.565,p＜0.05）,與CEA不相關（r=0.197,p＞0.05）。
　　5、術前結直腸癌患者血清sMICA、CEA、CA19-9陽性率的比較：術前58例結直腸癌者中有46例血清 sMICA高于正常人上限（0.500ng/ml），陽性率為79.3％，而CEA、 CA19-9的陽性率分別為46.6%、39.7%。
　　6、術后一月結直腸癌患者血清sMICA、CEA、C

9、A19-9變化：術前血清sMICA陽性的39例結直腸癌患者中，術后一月有26例轉陰，其中根治性手術24例，姑息手術2例子，兩組間有顯著差異（X2=30.44，P＜0.0001）,術前血清CEA陽性的23例結直腸癌患者中，術后一月有11例轉陰，其中根治性手術10例，姑息手術1例子，兩組間有顯著差異（X2=8.478，P＜0.0001），術前血清CA19-9陽性的21例結直腸癌患者中，術后一月有,9例轉陰，其中根治性手術9例，姑息手術0例子

10、，兩組間有顯著差異（X2=27.923，P＜0.0001）
　　7、HLA-A*02:01確認為大腸癌風險等位基因，HLA-B與MICA位點連鎖不平衡存在具結直腸癌免疫遺傳相關風險單倍型的可能。
　　8、發(fā)現(xiàn)一個新的等位基因 HLA-A*33:03:14.已提交 GeneBank，并于2013年2月被世界衛(wèi)生組織 HLA因子命名委員會正式命名為 HLA-A*33:03:14。Genbank注冊號為HWS10017874。

11、r>　　結論：
　　1、結直腸癌患者血清的sMICA蛋白明顯高于正常人，其升高的水平與腫瘤的Ducks分期、浸潤深度、組織學分化、淋巴結轉移、體重減輕、腫瘤大小有密切的關系。
　　2、血清sMICA蛋白、CEA、CA19-9的手術前后動態(tài)檢測有助于臨床判定病情、監(jiān)控療效，同時檢測結直腸癌患者血清sMICA的水平有可能作為診斷、預測復發(fā)及預后的重要指標。
　　3、結直腸癌病人及具相同遺傳背景的人群在術前可找出高?；蛉巳?/p>