CYP11A1在IFG-1保護(hù)心肌細(xì)胞線粒體機(jī)制中的作用.pdf

1、目的：
　　 氧化應(yīng)激引起的心肌損傷在心臟疾病中起著至關(guān)重要的作用。胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)可以促進(jìn)多種細(xì)胞的存活。但其對(duì)心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用未明，也因此限制了IGF-1的臨床應(yīng)用。心肌線粒體是氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞毒性的目標(biāo)細(xì)胞器。本文研究了IGF-1在氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的大鼠心肌H9C2細(xì)胞凋亡中的一個(gè)新的線粒體機(jī)制。
　　 方法：
　　 實(shí)驗(yàn)設(shè)置3個(gè)時(shí)間點(diǎn)(12h，24h，48h)IGF-1處理

2、組，和相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組。用過(guò)氧化氫和無(wú)血清誘導(dǎo)大鼠心肌H9C2細(xì)胞凋亡，觀察IGF-1在抗氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的大鼠心肌H9C2細(xì)胞凋亡中的信號(hào)傳導(dǎo)途徑。大鼠心肌H9C2細(xì)胞凋亡以annexin V/PI雙染色法用流式細(xì)胞儀檢測(cè)。無(wú)血清誘導(dǎo)大鼠心肌H9C2細(xì)胞凋亡，加入IGF-1和/或LY294002處理，觀察大鼠心肌細(xì)胞中IGF-1對(duì)CYP11A1基因表達(dá)的調(diào)控。用RT-PCR法檢測(cè)CYP11A1基因RNA表達(dá)，用Western-blot法檢

3、測(cè)蛋白質(zhì)表達(dá)。用JC-1染色法檢測(cè)IGF-1對(duì)無(wú)血清誘導(dǎo)的大鼠心肌H9C2細(xì)胞線粒體膜電位(△Ψm)降低的改善情況。
　　 結(jié)果：
　　 用流式細(xì)胞儀觀察到無(wú)血清可以誘導(dǎo)大鼠心肌H9C2細(xì)胞凋亡，3h組細(xì)胞早期凋亡率最高。各時(shí)間點(diǎn)IGF-1單獨(dú)處理組大鼠心肌H9C2細(xì)胞CYP11A1基因的RNA和蛋白質(zhì)表達(dá)與相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組相比下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義：RNA表達(dá)(F=388.32，P<0.01)，蛋白質(zhì)表達(dá)(F=77.7

4、5，P<0.01)；P13通道抑制劑LY294002單獨(dú)處理組的心肌細(xì)胞CYP11A1基因RNA表達(dá)下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=198.24，P<0.01)。IGF-1與LY294002共同作用組CYP11A1基因的RNA和蛋白質(zhì)表達(dá)與無(wú)血清對(duì)照組相比下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，RNA表達(dá)(F=198.24，P<0.01)，蛋白質(zhì)表達(dá)(F=189.26，P<0.01)。IGF-1可以減少無(wú)血清誘導(dǎo)的大鼠心肌H9C2細(xì)胞線粒體膜電位(△Ψm)