Ⅲ型前列腺炎患者精液和前列腺按摩液菌群結(jié)構(gòu)多樣性研究.pdf

1、背景:慢性前列腺炎（Chronic Prostatitis Syndrome，CPS）是目前成年男性中一種常見疾病，是世界范圍內(nèi)僅次于糖尿病影響男性健康的重要疾病，并且發(fā)病率呈上升的趨勢(shì)。在我國(guó)泌尿外科門診病人中CP患者約占25％，超過一半的男性在一生中的某一些階段有過CPS的癥狀。CPS可引起尿頻、尿急、排尿困難、疼痛。CPS與性功能障礙、不育的相關(guān)性研究也日益引起重視。其中90％為Ⅲ型(ChronicProstatitis/Chro

2、nic plvic pain syndrome，CP/CPPS)。ⅢA（慢性前列腺炎）、ⅢB（慢性骨盆疼痛綜合癥）各近50％。常規(guī)細(xì)菌方法培養(yǎng)無(wú)細(xì)菌，臨床常用抗感染治療并且有效，提示該型前列腺組織可能同樣存在微生物。對(duì)Ⅲ型CPS患者前列腺按摩液(EPS)采用選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)菌，68％發(fā)現(xiàn)凝固酶陰性球菌，19.1％發(fā)現(xiàn)L型細(xì)菌。但是，因?yàn)檫x擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)費(fèi)時(shí)費(fèi)力，且條件限制，部分微生物難以培養(yǎng)，導(dǎo)致假陰性結(jié)果，影響了對(duì)該病的認(rèn)識(shí)和臨床療

3、效。
　　分子生物學(xué)方法，如變性梯度凝膠電泳(denaturing gradient gel electrophoresis，DGGE)、高通量454測(cè)序技術(shù)，為研究健康男性以及Ⅲ型前列腺炎患者的前列腺微生態(tài)及菌群改變提供了嶄新的思路。有文獻(xiàn)報(bào)道在前列腺穿刺活檢組織中查尋前列腺中全部菌群，試圖找到關(guān)鍵引起CP/CPPS發(fā)生的關(guān)鍵病原菌。但作為有創(chuàng)性方法，前列腺穿刺活檢有適應(yīng)證及取材的限制。而EPS和精液因取材方便，可多次取樣，易評(píng)

4、價(jià)療效。
　　因此本研究將聯(lián)合以上兩種分子生物學(xué)技術(shù)，研究Ⅲ型前列腺炎患者EPS和精液的微生態(tài)及菌群改變，作為創(chuàng)新點(diǎn)。
　　目的:基于16S rDNA基因V3區(qū)PCR-DGGE(變性梯度凝膠電泳)半定量檢測(cè)和高通量454二代測(cè)序技術(shù)，調(diào)查CP患者的前列腺按摩液和精液微生物群落結(jié)構(gòu)的組成，探討CP與菌群變化的相關(guān)性，期望為Ⅲ型慢性前列腺炎進(jìn)一步明確病因，為診斷和治療提供新的線索，從而針對(duì)性選擇治療措施，以達(dá)到改善療效、縮短療程

5、目的。
　　方法:研究的對(duì)象為Ⅲ型慢性前列腺炎患者和正常健康男性對(duì)照組各30例，用兩種方法檢測(cè)前列腺按摩液及精液標(biāo)本:
　　1.基于16S rRNA的PCR-DGGE指紋圖譜分析精液和前列腺按摩液的微生物菌群多樣性變化;
　　2.基于高通量454二代測(cè)序技術(shù)研究精液和前列腺按摩液的微生物菌群組成結(jié)構(gòu)及變化。
　　結(jié)果:1.DGGE譜和高通量454二代測(cè)序技術(shù)檢測(cè)結(jié)果一致。健康男性生殖道存在一個(gè)正常的微生物群落。每

6、個(gè)個(gè)體的前列腺按摩液與精液菌群有明顯同源條帶。在群落結(jié)構(gòu)組成比例上，每個(gè)個(gè)體的精液和前列腺按摩液的菌群整體組成結(jié)構(gòu)存在顯著差異;前列腺炎患者的前列腺按摩液與精液菌群組成的結(jié)構(gòu)相似性均顯著低于正常健康對(duì)照組。
　　2.前列腺按摩液和精液的主要菌群的組成門類相似，主要由厚壁菌門(Firmicutes)、放線菌門(Actinobacteria)，擬桿菌門(Bacteroidetes)，變形桿菌門(Proteobacteria)，梭桿菌門

7、(Fusobacteria)，無(wú)壁菌門(Tenericutes)，藍(lán)細(xì)菌門(Cyanobacteria)，綠屈撓菌門(Chloroflexi)，和酸桿菌門(Acidobacteria)等構(gòu)成。其組成除放線菌門和擬桿菌門外，其他優(yōu)勢(shì)菌在門的水平上均存在顯著差異（P＜0.05或P＜0.01）。例如厚壁菌門在EPS中占整個(gè)菌群組成的59.9％，而厚壁菌門在精液中雖然仍是主要優(yōu)勢(shì)菌群，但是僅占整個(gè)菌群的39.5％。，精液中以下細(xì)菌較EPS顯著增

8、加:變形桿菌門(19.23％ vs.7.2％)，梭桿菌門(4.04％vs.3.57％)，無(wú)壁菌門(2.28％vs.1.38％)，藍(lán)細(xì)菌門(3.28％vs.0.95％)，綠屈撓菌門(1.56％ vs.0.44％)。相反，與EPS相比，精液中放線菌門比例顯著降低(0.26％vs.0.66％)。
　　3.Ⅲ型前列腺炎患者的精液菌群組成與健康對(duì)照組存在顯著差異。在門的水平上，前列腺炎患者的精液中疣微菌門（Verrucomicro）和互養(yǎng)菌

9、門(Synergistetes)顯著高于正常健康對(duì)照組。
　　1.4.Ⅲ慢性前列腺患者的前列腺按摩液與健康對(duì)照組比較，在門的水平上，與精液的結(jié)果一致，疣微菌門顯著高于正常健康對(duì)照組，并且僅在在慢性前列腺炎患者中可以檢出，益生菌乳酸桿菌(Lactobacillus)的相對(duì)豐度顯著降低。
　　結(jié)論:本研究首次對(duì)男性精液和前列腺按摩液的微生物菌落進(jìn)行了全面分析，發(fā)現(xiàn)其組成遠(yuǎn)比以往認(rèn)識(shí)的豐富;
　　1.每個(gè)個(gè)體的精液、前列腺按

10、摩液存在共有菌，但整體上二者菌群組成存在明顯差異，提示在菌群組成結(jié)構(gòu)上，精囊液與前列腺液可能存在不同;
　　2.Ⅲ前列腺炎患者的精液菌群結(jié)構(gòu)較健康男性發(fā)生了顯著變化，疣微菌門(Verrucomicro)和互養(yǎng)菌門（Synergistetes）顯著高于正常健康對(duì)照組;
　　3.Ⅲ前列腺炎患者的前列腺按摩液菌群雖然變化不顯著，但同樣檢測(cè)出疣微菌門（Verrucomicro）菌，值得動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究其作用。
　　4.Ⅲ前列