單純皰疹病毒I型UL43基因體外表達及功能初步研究.pdf

1、目的:
　　體外構(gòu)建HSV-1UL43真核表達載體,利用生物信息學(xué)分析結(jié)果,在體外對其表達的蛋白質(zhì)的功能進行初步研究,為探究UL43編碼蛋白質(zhì)與藥物作用的靶點打下基礎(chǔ)。
　　方法:
　　1.利用生物信息學(xué)DNAStar軟件,Protpara軟件soPMA程序ESyPred3D程序http://bp.nuap.nagoya-u.ac.jp/sosui/;http://mendel.imp.ac.at/sat/DAS/DA

2、S.html等網(wǎng)站或程序?qū)SV-1UL43遺傳進化樹和UL43p結(jié)構(gòu)和功能進行預(yù)測和分析。
　　2.利用基因工程原理方法,構(gòu)建HSV-1UL43用于體外表達的T克隆載體和真核表達載體。
　　3.構(gòu)建HSV-1膜融合過程中必要的四種基本糖蛋白(gB,gD,gH-gL)T克隆載體以及真核表達載體。利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效應(yīng)細胞,細胞免疫酶聯(lián)分析,體外分析UL43p在細胞到細胞膜融合過程中的作用。
　　結(jié)果:
　　1.HSV

3、-1UL43基因存在于α和γ類皰疹病毒中,并與猴類同源性較高,與同為人類皰疹病毒的HHV-3及HHV-8同源性較低。但結(jié)構(gòu)顯示Prv UL43同源性與HSV-1較高。
　　2.HSV-1UL43p中磷酸化位點較為豐富。UL43p跨膜結(jié)構(gòu)綜合預(yù)測為8跨膜,與PrvUL43p相類似。
　　3.體外構(gòu)建的克隆載體和真核表達載體經(jīng)測序后,其序列與實際情況相符。HSV-1UL43p分子量為34kDa。
　　4.細胞免疫酶聯(lián)反應(yīng)顯