KLF4調(diào)控MMP9對(duì)原發(fā)性肝癌的侵襲遷移能力的影響.pdf

1、目的:
　　研究KLF4基因與MMP9基因在肝癌組織和肝癌癌旁組織中的表達(dá)情況，探討KLF4基因調(diào)節(jié)MMP9基因的表達(dá)變化對(duì)肝癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響，探討肝細(xì)胞癌侵襲和轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制，腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的分子網(wǎng)絡(luò)，為肝癌轉(zhuǎn)移侵襲的治療提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1、原發(fā)性肝癌病人癌和癌旁組織（距病灶2c m的組織）標(biāo)本搜集后，通過(guò)免疫組化、qRT-PCR和WB檢測(cè)50例肝癌組織及對(duì)應(yīng)癌旁組織中KLF4基因和MMP

2、9基因的表達(dá)。
　　2、質(zhì)粒(生物公司代為設(shè)計(jì)合成)轉(zhuǎn)染后，上調(diào)肝癌細(xì)胞HepG2中KLF4基因的表達(dá)，檢測(cè)MMP9基因mRNA及蛋白表達(dá)水平的變化；
　　3、運(yùn)用Tra nswe ll侵襲實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)觀測(cè)轉(zhuǎn)染后Hep G2細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力的變化。
　　4、統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件，正態(tài)分布、方差齊的測(cè)量數(shù)據(jù)，以?±s表示，用t檢驗(yàn)做組間比較，用單因素方差分析做多組均數(shù)間比較，P＜0.05，說(shuō)明差異具有

3、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1、qRT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)肝癌組織標(biāo)本中KLF4基因mRNA的表達(dá)較對(duì)應(yīng)的癌旁組織標(biāo)本更低（P＜0.05）；而MMP9 mRNA的表達(dá)較對(duì)應(yīng)的癌旁組織標(biāo)本更高（P＜0.05）。WB檢測(cè)肝癌組織KLF4蛋白表達(dá)低于癌旁組織；而MMP9蛋白的表達(dá)高于癌旁組織。
　　2、免疫組化檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)KLF4蛋白在76％（38/50）的病例肝癌組織呈低表達(dá)，而僅有10%（5/50）的癌旁組織中呈低表達(dá)；M

4、MP9蛋白在84%（42/50）的病例肝癌組織呈高表達(dá)，而僅有12%（6/50）的癌旁組織中呈高表達(dá)。
　　3、qRT-PCR和WB檢測(cè)發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)KLF4組中KLF4 mRNA和蛋白的表達(dá)較正常對(duì)照組和空白質(zhì)粒組明顯升高（P＜0.05），而正常對(duì)照組、空白質(zhì)粒組之間KLF4 mRNA表達(dá)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。另外，過(guò)表達(dá)KLF4后，發(fā)現(xiàn)MMP9mRNA和蛋白的表達(dá)降低（P＜0.05）。
　　4、Transwel

5、l侵襲實(shí)驗(yàn)顯示：相對(duì)于正常對(duì)照組和空白質(zhì)粒組，過(guò)表達(dá)KLF4組的細(xì)胞侵襲能力降低（P＜0.05）；劃痕試驗(yàn)結(jié)果顯示：相對(duì)于正常對(duì)照組和空白質(zhì)粒組，過(guò)表達(dá)KLF4組細(xì)胞的劃痕愈合率明顯下降（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、在原發(fā)性肝癌中，KLF4基因的表達(dá)明顯低于癌旁組織，而MMP9基因表達(dá)明顯高于癌旁組織。
　　2、在肝癌細(xì)胞HepG2中上調(diào)KLF4基因的表達(dá)可引起MMP9基因的表達(dá)下降，進(jìn)而抑制肝癌細(xì)胞的侵襲和