食用菌中硒的形態(tài)分析.pdf

1、通過(guò)本課題的研究，獲得富硒食用菌子實(shí)體栽培的成功經(jīng)驗(yàn)，并可用于生產(chǎn)實(shí)踐，為富硒食用菌的科學(xué)化、規(guī)模化、市場(chǎng)化栽培提供科學(xué)的理論依據(jù)。根據(jù)研究硒在食用菌體內(nèi)的分布、遷移轉(zhuǎn)化規(guī)律以及各種存在形態(tài)，可知通過(guò)食用菌為載體能有效地將無(wú)機(jī)硒轉(zhuǎn)化為人體極易吸收且無(wú)毒的有機(jī)硒化合物。并對(duì)其中的有機(jī)硒化合物從分子水平上采用現(xiàn)代HPLC-ICP-MS聯(lián)機(jī)技術(shù)進(jìn)行分離分析，研究其活性機(jī)理和生物學(xué)功能，實(shí)現(xiàn)了從分子生物學(xué)角度對(duì)新的補(bǔ)硒資源和更有效的生物活性因子

2、進(jìn)行有益的探索，為研究人類(lèi)硒源的生物安全性和高效可利用性提供科學(xué)的理論依據(jù)。論文具體研究?jī)?nèi)容如下： 第一章緒論 首先介紹了硒的生理生化功能及對(duì)人體健康的影響，針對(duì)如何科學(xué)補(bǔ)硒，介紹了硒的生物有機(jī)化和硒源的生物學(xué)研究進(jìn)展，進(jìn)而對(duì)生物體中硒的存在形態(tài)及不同形態(tài)含硒化合物的提取、分離、純化、鑒定、分析方法等內(nèi)容的國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀進(jìn)行了綜述，之后關(guān)于硒的生物活性、功效學(xué)等方面的應(yīng)用研究作以介紹。 第二章富硒食用菌的培養(yǎng)及其

3、生物富硒特性的研究 采用250ml搖瓶振蕩培養(yǎng)的方法對(duì)蛹蟲(chóng)草和金針菇菌絲體的富硒特性進(jìn)行了研究；在此基礎(chǔ)上與當(dāng)?shù)厥秤镁a(chǎn)基地合作，采用現(xiàn)代農(nóng)業(yè)技術(shù)培養(yǎng)了大批富硒蛹蟲(chóng)草和金針菇子實(shí)體，并在生產(chǎn)和實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)二者的富硒特性進(jìn)行了系統(tǒng)研究。 第三章食用菌中硒的分析方法研究 采用石英高壓消化罐在較低溫度下進(jìn)行緩慢樣品消化，減少了消化過(guò)程中硒的損失。分別建立了石墨爐原子吸收法和ICP-MS法對(duì)食用菌中硒的含量進(jìn)行測(cè)定。

4、 第四章富硒食用菌中硒的分布、賦存形態(tài)及遷移轉(zhuǎn)化規(guī)律的研究 對(duì)蛹蟲(chóng)草和金針菇的富硒能力、富硒倍數(shù)、硒的生物有機(jī)化及其體內(nèi)硒的分布轉(zhuǎn)移規(guī)律進(jìn)行了研究。 第五章富硒食用菌中硒蛋白的形態(tài)分析 采用生化分離技術(shù)對(duì)富硒蛹蟲(chóng)草和金針菇子實(shí)體中的硒蛋白以硫酸銨分級(jí)沉淀的方式進(jìn)行分離、純化，對(duì)各級(jí)鹽析蛋白中含硒量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明，蛹蟲(chóng)草和金針菇可溶性蛋白中硒含量為樣品總硒含量的：22.1％和5.1％。；進(jìn)一步采用SE-H

5、PLC-ICP-MS聯(lián)機(jī)方法對(duì)粗分的硒蛋白進(jìn)行在線分離分析，確定富硒蛹蟲(chóng)草中至少含有七種硒蛋白，其分子量分布在114.0-1.0kDa之間，其中硒含量較高的是分子量為22.6kDa和1.6kDa的硒蛋白，二者含硒量之和占可溶性硒蛋白中硒含量的86.8％；富硒金針菇中至少含有六種硒蛋白，其分子量分布在74.0-9.0kDa之間，其中硒含量較高的是分子量為34kDa、25kDa和12kDa的硒蛋白，其含硒量之和占可溶性硒蛋白中硒含量的62.

6、6％。研究中發(fā)現(xiàn)無(wú)論是富硒蟲(chóng)草還是金針菇其可溶性的大分子硒蛋白一旦脫離子實(shí)體其生物活性很難保持，容易轉(zhuǎn)化成小分子的含硒蛋白、含硒低聚肽和更小的硒代氨基酸等。相對(duì)而言以各種小分子形式存在的含硒化合物，如硒代氨基酸等卻能穩(wěn)定存在于所在介質(zhì)中，發(fā)揮其特有的生物活性作用。進(jìn)一步結(jié)合RP-HPLC-ICP-MS聯(lián)機(jī)技術(shù)，對(duì)富硒食用菌中可溶性含硒生物分子進(jìn)行確認(rèn)。 第六章富硒食用菌中硒多糖的形態(tài)分析 通過(guò)對(duì)富硒金針菇硒多糖提取條件的

7、優(yōu)化，可得到含硒7.97μg/g的粗硒多糖，對(duì)粗硒多糖進(jìn)一步采用SE-HPLC-ICP-MS聯(lián)機(jī)的方法進(jìn)行在線分離分析，確定富硒金針菇中至少含有三種硒多糖，其分子量分別為4.27kDa、1.868kDa、1.54kDa，含硒量分別占可溶性硒多糖中硒含量的15.05％、48.31％、36.38％。將粗多糖經(jīng)柱層析系統(tǒng)分離純化，所得精多糖進(jìn)行紅外光譜分析可知富硒金針菇中水溶性硒多糖與普通多糖結(jié)構(gòu)相似，而堿溶性硒多糖中由于硒酸酯的形成改變了原