人類(lèi)臍血干細(xì)胞移植對(duì)大鼠外傷性視神經(jīng)損傷的療效及其作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：建立大鼠定量視神經(jīng)損傷模型，為研究視神經(jīng)損傷后的治療奠定基礎(chǔ)。
　　 方法：健康SD大鼠54只，隨機(jī)分為三組，分別為損傷組(A組)、假損傷對(duì)照組(B組)、正常對(duì)照組(C組)。A組24只大鼠，左眼為損傷眼，右眼為未損傷眼，作為對(duì)照，按損傷后存活時(shí)間不同分為3d組、7d組、14d組、28d組，每組6只，暴露視神經(jīng)，應(yīng)用40 g力的視神經(jīng)夾在大鼠眼球后2 InIll處夾視神經(jīng)30s；B組24只大鼠，左眼為假損傷眼，右眼為未損傷眼

2、，作為對(duì)照，按損傷后存活時(shí)間不同分為3d組、7d組、14d組、28d組，每組6只，僅暴露視神經(jīng)但不進(jìn)行鉗夾損傷；6只為正常對(duì)照組。均于處死前7 d采用雙上丘注射5％熒光金(FG)標(biāo)記雙眼視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。取眼球標(biāo)本并分離視神經(jīng)至視交叉。視網(wǎng)膜鋪片熒光照相，RGCs計(jì)數(shù)及RGCs標(biāo)識(shí)率計(jì)算。并對(duì)視網(wǎng)膜切片進(jìn)行蘇木精一伊紅染色，觀(guān)察視神經(jīng)損傷后視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)變化。
　　 結(jié)果：1.FG逆行標(biāo)記進(jìn)行RGC計(jì)數(shù)及RGCs標(biāo)識(shí)率：損傷組各時(shí)

3、間點(diǎn)損傷眼RGCs計(jì)數(shù)(3d組152.26±25.12，7d組111.19±20.32，14d組101.23±17.19，28d組94.86±18.26)與非損傷眼(3d組192.16±32.12，7d組189.26±26.16，14d組191.76±25.29，28d組186.56±23.76)比較，差異均有顯著性(P〈.O.05)。正常對(duì)照組及假損傷對(duì)照組左、右眼RGCs比較，差異無(wú)顯著性(P〉O.05)。
　　 2.損傷眼

4、視神經(jīng)損傷后不同時(shí)間RCCs計(jì)數(shù)(3d組152.26±25.12，7d組111.19±20.32，14d組101.23±17.19，28d組94.86±18.26)逐漸下降(P〈O.05)，各時(shí)間點(diǎn)RCCs計(jì)數(shù)兩兩比較，14d組與28d組間差異無(wú)顯著性(P〉O.05)，其他時(shí)間點(diǎn)間比較差異均有顯著性(P(O.05)。視神經(jīng)損傷后RGCs標(biāo)識(shí)率(3d組79.35％±8.29％，7d組59.76％±7.79％，14d組53.26％±7.26

5、％，28d組51.29％±3.26％)隨時(shí)間延長(zhǎng)漸進(jìn)性降低(P〈O.05)。各時(shí)間點(diǎn)RGCs標(biāo)識(shí)率兩兩比較，14d組與28d組間差異無(wú)顯著性(P〉O.05)，其他時(shí)間點(diǎn)間比較差異均有顯著性(f(O.05)。正常對(duì)照組及假損傷對(duì)照組不同時(shí)間點(diǎn)RCCs計(jì)數(shù)及RGCs標(biāo)識(shí)率差異均無(wú)顯著性(P〉O.05)。
　　 3.組織病理改變：損傷組：視神經(jīng)損傷后，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層出現(xiàn)核固縮、視網(wǎng)膜各層變薄、細(xì)胞排列紊亂、視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞減少，致

6、傷后不同時(shí)間點(diǎn)上述改變的程度不同。損傷處視神經(jīng)腫脹、出血，膠質(zhì)細(xì)胞排列紊亂，空泡樣變性，隨損傷后時(shí)間延長(zhǎng)而加重。正常對(duì)照組及假損傷對(duì)照組未見(jiàn)明顯病理改變
　　 結(jié)論：應(yīng)用40 g力視神經(jīng)夾在大鼠眼球后2mm處夾視神經(jīng)30s能成功建立定量視神經(jīng)損傷動(dòng)物模型。
　　 目的：觀(guān)察研究人臍血干細(xì)胞(hUCBSC)移植對(duì)視神經(jīng)部分受損S-D大鼠視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞(RGCs)的保護(hù)作用。
　　 方法：將96只健康成年S—D大鼠隨機(jī)

7、分為六組，每組16只，均使用第一章得到的方法在成年SD大鼠造成部分視神經(jīng)損傷模型，均損傷左眼。A組：傷后1周玻璃體腔注射臍血干細(xì)胞載體(PBS)，B組：傷后l周玻璃體腔注射神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，C組：傷后1周玻璃體腔注射hUCBSC，D組：傷后1周玻璃體腔注射hUCBSC+神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，E組：傷后1周球周注射hUCBSC，F(xiàn)組：傷后1周尾靜脈注射hUCBSC。六組分別于注射后7d、14d、21d、28d處死動(dòng)物。處死前7天雙上丘注射5％熒光金(

8、FG)逆行標(biāo)記雙眼RGCs。然后按時(shí)間先后處死大鼠分離視網(wǎng)膜置于熒光顯微鏡下，計(jì)數(shù)RGCs并計(jì)算RGCs標(biāo)識(shí)率，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　 結(jié)果： A、B、C、D四組視神經(jīng)損傷眼RGCs計(jì)數(shù)均低于未損傷眼(P

9、性(P<0.05)。D組RGCs標(biāo)識(shí)率均高于B組、C組，且差異均具有顯著性(P0.05)。C、E、F三組視神經(jīng)損傷眼節(jié)細(xì)胞計(jì)數(shù)均低于未損傷眼(P

10、F組無(wú)顯著性差異(P>O.05)。
　　 結(jié)論：hUCBSC移植入視神經(jīng)損傷大鼠視網(wǎng)膜中可減緩RGCs的凋亡，對(duì)RGCs具有一定的保護(hù)作用，其與神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子作用強(qiáng)度相仿，而hUCBSC+神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子保護(hù)作用最強(qiáng)，且玻璃體腔注射法效果最佳。
　　 目的：探討人臍血干細(xì)胞(hUCBSC)移植在大鼠視神經(jīng)損傷后對(duì)受損視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞保護(hù)的機(jī)制。
　　 方法：將36只健康成年S-D大鼠隨機(jī)分為A組(hUCBSC移植組)和B組

11、(對(duì)照組)。每組18只大鼠，兩組各取15只制成視神經(jīng)部分損傷大鼠模型，左眼為損傷眼。另3只作為正常眼進(jìn)行組內(nèi)的對(duì)照，A組損傷眼玻璃體腔注射hUSBSC懸液(106個(gè))，B組損傷眼注射同等體積PBS，兩組分別于治療后3d、7d、14d、21d、28d(每個(gè)時(shí)間段3只大鼠，另外3只作為移植前正常大鼠)采用半定量RTl_PCR方法檢測(cè)BDNF、GDNF mRNA在視網(wǎng)膜內(nèi)的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果： hUCBSC移植后A組(hUCBSC

12、移植組)與B組(對(duì)照組)相比，除第1周視網(wǎng)膜內(nèi)表達(dá)BDNF無(wú)明顯差別外，余時(shí)間段BDNF、GDNF在視網(wǎng)膜內(nèi)分泌水平A組均明顯高于B組。移植組BDNF表達(dá)一直呈升高趨勢(shì)，特別是在14d后，升高更加明顯.；而移植組GDNF表達(dá)21d升高至高峰，28d時(shí)也有下降。表明hUCBSC移植后在視網(wǎng)膜內(nèi)持續(xù)分泌BDNF及GDNF。
　　 結(jié)論： hUCBSC在視神經(jīng)損傷大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)可持續(xù)分泌神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子BDNF及GDNF，彌補(bǔ)視神經(jīng)損傷后維