核因子κB與妊娠糖尿病大鼠子宮內(nèi)膜胰島素抵抗關系的研究.pdf

1、妊娠糖尿病(GDM)是指在妊娠期間出現(xiàn)或者首次被發(fā)現(xiàn)的糖耐受不良，它是圍生期一種常見的并發(fā)癥，發(fā)病率有逐年上升的趨勢。GDM的發(fā)生對母親和胎兒的健康有嚴重的危害，孕期母親糖代謝異常可影響胎兒著床及發(fā)育，引起自然流產(chǎn)率較正常妊娠增加。胰島素抵抗(IR)是GDM的病理學基礎，對GDM的發(fā)生發(fā)展起關鍵作用。
　　核因子-κB(NF-κB)是一種重要的核轉(zhuǎn)錄因子，廣泛存在于細胞中，它參與了細胞信號轉(zhuǎn)導和基因表達調(diào)控，在機體的免疫應答、炎癥

2、反應和細胞的生長發(fā)育等方面都發(fā)揮著重要的作用。炎癥因子如腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、氧化應激、游離脂肪酸(FFA)等均能激活NF-κΒ。NF-κB可通過影響胰島素通路的關鍵分子干擾胰島素信號的傳遞，進而導致IR的發(fā)生。葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白-4(GLUT-4)是胰島素信號轉(zhuǎn)導通路的關鍵分子，主要負責機體各類細胞的基礎糖需求。GLUT-4蛋白表達的下調(diào)能夠?qū)е陆M織對胰島素敏感性降低，進而引起IR。子宮是女性生殖功能的基本單位，也是機體能量代謝

3、活躍的器官。子宮內(nèi)膜含有介導胰島素作用的所有信號蛋白和代謝酶，在胰島素的刺激下，子宮內(nèi)膜組織攝取并利用葡萄糖，進而為子宮內(nèi)膜的生長和分化提供能量保證。孕期子宮內(nèi)膜對葡萄糖的攝取及利用又為胎兒的正常發(fā)育提供保證。
　　目的：
　　(1)構建GDM大鼠模型，觀察GDM對大鼠胚胎著床與流產(chǎn)情況的影響。
　　(2)研究GDM大鼠子宮內(nèi)膜組織中TNF-α、FFA、NF-κB、GLUT-4的表達變化，并應用NF-κB抑制劑四氫化吡

4、咯二硫代氨基甲酸酯(PDTC)進行干預，觀察抑制NF-κB以后，大鼠子宮內(nèi)膜組織中GLUT-4表達的變化。
　　(3)探討NF-κB、GLUT-4在GDM大鼠子宮內(nèi)膜IR發(fā)病及發(fā)展過程中的可能作用機制。
　　方法：
　　(1)30只SD孕鼠隨機分為正常妊娠對照(NC)組、妊娠糖尿病(GDM)組和PDTC干預組，每組10只。采用腹腔注射鏈脲霉素(STZ)建立大鼠GDM的模型。PDTC干預組大鼠在建模后每日腹腔注射PDTC

5、(40mg/kg)。檢測大鼠藥物注射前，用藥3d后(妊娠4d)和妊娠20d時體重、血糖的變化。將大鼠于分娩前即妊娠20d處死，分離出子宮并計數(shù)大鼠胚胎著床與流產(chǎn)情況。
　　(2)應用HE染色觀察各組大鼠子宮內(nèi)膜的形態(tài)學改變。
　　(3)應用ELISA法測定各組大鼠子宮內(nèi)膜勻漿中TNF-a含量的變化，比色法測定各組大鼠子宮內(nèi)膜勻漿中FFA的含量變化。
　　(4)應用免疫組化，westernblot檢測各組大鼠子宮內(nèi)膜組織

6、NF-κB，GLUT-4的表達變化，用RT-PCR檢測各組大鼠子宮內(nèi)膜組織GLUT-4mRNA的表達變化，并做相關性分析。
　　結果：
　　(1)三組大鼠體重均有增長，但GDM組和PDTC干預組在妊娠4d及妊娠20d時體重均低于NC組(P<0.01)。GDM組和PDTC干預組大鼠注射STZ3d后即妊娠4d時和妊娠20d時血糖較NC組均明顯升高(P<0.01)。GDM組與NC組相比，胚胎著床數(shù)下降(P<0.01)，流產(chǎn)數(shù)增高(

7、P<0.01)。PDTC干預組胚胎著床數(shù)比GDM組有所增加(P<0.01)。
　　(2)與NC組相比，GDM組大鼠子宮內(nèi)膜腺體數(shù)目減少，腺體多為單個分散排列，腺腔小而直，腺上皮未見分泌泡，部分間質(zhì)水腫，有細胞壞死脫離現(xiàn)象。PDTC干預組大鼠子宮內(nèi)膜腺體數(shù)目較GDM組相對增多，腺腔增大，但腺體仍多為單個分散排列，但未見間質(zhì)水腫、細胞壞死現(xiàn)象。
　　(3)與NC組相比，GDM組和PDTC干預組大鼠子宮內(nèi)膜組織勻漿中TNF-a、F

8、FA的表達水平均增加(P<0.01)。
　　(4)與NC組相比，GDM組大鼠子宮內(nèi)膜組織中NF-κB的蛋白表達明顯增加(P<0.01)，GLUT-4的蛋白表達明顯減少(P<0.01)。與GDM組相比，PDTC干預組大鼠子宮內(nèi)膜組織中NF-κB的表達明顯減少(P<0.01)，GLUT-4蛋白的表達明顯增加(P<0.01)。與NC組相比，GDM組GLUT-4mRNA含量下降(P<0.01)，PDTC干預組較GDM組GLUT-4mRNA

9、的含量增加(P<0.01)。TNF-a、FFA與NF-κB的蛋白表達均呈正相關(P<0.01)；NF-κB與GLUT-4蛋白表達呈負相關(P<0.01)。
　　結論：
　　(1)本研究通過腹腔注射STZ構建大鼠GDM模型，注射STZ后大鼠體重減輕，空腹血糖升高并能維持高血糖至妊娠結束，表明該大鼠模型構建成功。
　　(2)GDM組大鼠子宮內(nèi)膜TNF-a、FFA的表達增加，且TNF-a、FFA與NF-κB的蛋白表達均呈正相

10、關，說明TNF-a、FFA在GDM的高表達可活化NF-κB，從而使NF-κB在GDM組表達增加。
　　(3)GDM組GLUT-4的表達減少，用NF-κB抑制劑PDTC干預后，GDM組子宮內(nèi)膜組織中NF-κB的表達下調(diào)，GLUT-4的表達上調(diào)，且NF-κB和GLUT-4的表達呈負相關，推測NF-κB可通過調(diào)節(jié)GLUT-4這一胰島素信號轉(zhuǎn)導通路關鍵分子的表達導致子宮內(nèi)膜代謝紊亂造成子宮內(nèi)膜IR，說明NF-κB和GLUT-4參與了GDM