AMI相關(guān)基因的芯片篩選及外周血單個核細胞HSPD1、CAT檢測和臨床意義.pdf

1、盡管近年來對AMI本質(zhì)和臨床防治有了深入的認識，但是AMI發(fā)病率和死亡率仍未明顯降低。近來研究表明，氧化應(yīng)激與AMI時病理生理過程有關(guān)，氧化應(yīng)激可造成AMI時心肌細胞壞死和心肌細胞凋亡。目前認為AMI是多基因表達異常引起的病理生理過程，基因芯片技術(shù)為研究AMI的疾病防治的分子機制提供了強有力的系統(tǒng)研究手段，可發(fā)現(xiàn)AMI異常表達的基因。這些基因的改變可能有助于認識AMI的發(fā)病機制，為將來AMI時心肌細胞損傷研究提供分子目標(biāo)，也可能成為AM

2、I療效的評價指標(biāo)。 目的： 1.了解AMI患者的臨床特征及CTnT、CKMB、Mgb、WBC、ANC、DNAC、SCAI分型之間的相互關(guān)系及其臨床意義。 2.通過Oligo基因芯片技術(shù)獲取在AMI時心肌細胞損傷的過程中是否有OS相關(guān)基因的參與。 3.選取有明顯上調(diào)的基因HSPD1和有明顯下調(diào)的基因CAT，通過實時PCR檢測來了解AMI患者PBMCs的HSPD1、CAT的mRNA表達量與臨床的關(guān)系及其在AM

3、I中的臨床意義。 材料與方法： 1.研究對象 符合AMI診斷標(biāo)準(zhǔn)的病人11例。其中男性7例，女性4例，平均年齡61.44V13.70.歲(33～75歲)，均確診為ST段抬高型心肌梗死。健康對照組為與患者年齡、性別相匹配的健康志愿者10人，其中男性7人，女性3人，平均年齡53.00±6.55歲(35~61歲)。所有研究對象經(jīng)檢查排除感染、嚴(yán)重肝腎功能損害、嚴(yán)重凝血功能不全、粒細胞缺乏、腫瘤以及自身免疫性等疾病。11

4、例病人樣本分別取自病人入院診治的第1d、第3d、第7d采肘靜脈血；10例健康志愿者晨起空腹采靜脈血。每次采血6ml，立即注入含0.05ml肝素的無菌離心管。 2.實驗方法 PBMCs的分離采用淋巴細胞分離液密度梯度離心法。采用Oligo基因芯片實驗篩選AMI患者PBMCs相關(guān)基因，并選取有明顯上調(diào)的基因HSPD1和有明顯下調(diào)的基因CAT，并通過實時PCR驗證。 3.統(tǒng)計學(xué)分析計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，

5、各組間比較用方差分折(ANOVA)進行；計數(shù)資料用非參數(shù)檢驗，相關(guān)分析用簡單相關(guān)分析法，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。通過臺式掃描儀獲得芯片圖像，使用綜合型GEArray表達分析配套軟件(GEArrayExpressionAnalysisSuite)進行芯片數(shù)據(jù)分析。 結(jié)果： 1.AMI患者組外周血CKMB、CTnT、Mgb、WBC、ANC、HSCRP、GOT、GPT、LDH、HDLC均與健康對照組有顯著差異(P<0

6、.05)。 2.AMI患者組外周血CTnT、CKMB、Mgb分別與GOT、GPT、LDH之間均無相關(guān)性，CKMB、Mgb分別與WBC、ANC均呈明顯的正相關(guān)性。CTnT與CKMB、Mgb三者之間均呈明顯的正相關(guān)性。SCAI與DNCA之間呈正相關(guān)性。 3.應(yīng)用基因芯片篩選AMI患者相關(guān)基因，全部有明顯上調(diào)的基因共8個，即GADD45A、HSPD1、PRDX2、RAD50、TNFSF6、TRADD、DNAJB1、DNAJB2

7、基因：全部有明顯下調(diào)的基因共4個，即ATM、CAT、CCNG1、CYP1A1基因。 4.RealTimePCR結(jié)果表明：AMI患者外周血單個核細胞(PBMCs)的HSPD1基因mRNA表達量明顯升高，表現(xiàn)上調(diào)；CAT基因mRNA表達量增加量低，表現(xiàn)下調(diào)。HSPD1與CTnT、WBC、ANC無相關(guān)性；但HSPD1與CKMB之間則呈正明顯的相關(guān)性，HSPD1與Mgb也呈明顯的正相關(guān)性；病例組CAT基因表達與CTnT、CKMB、Mgb