動(dòng)脈硬化閉塞癥患者下肢缺血肌肉的形態(tài)學(xué)及線粒體功能的變化研究.pdf

1、目的
　　 隨著我國(guó)人口的老齡化和國(guó)人飲食習(xí)慣的改變,下肢動(dòng)脈硬化閉塞癥患者不斷增多,嚴(yán)重威脅國(guó)人的健康。它不僅會(huì)使患者出現(xiàn)間歇性跛行,而且在嚴(yán)重缺血時(shí)會(huì)使患者出現(xiàn)靜息痛、肢體壞死及截肢,嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量,甚至危及生命。下肢動(dòng)脈硬化閉塞癥引起肢體缺血后,肌肉組織的形態(tài)會(huì)發(fā)生變化,進(jìn)而影響下肢的功能。線粒體是糖類(lèi)、脂肪和氨基酸等物質(zhì)最終氧化釋能的場(chǎng)所,主要功能是進(jìn)行氧化磷酸化、合成ATP,為細(xì)胞生命活動(dòng)提供能量。而缺血后骨骼

2、肌發(fā)生的一系列的變化,比如Ca2+濃度及線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔(MPTP)的開(kāi)放程度的提高會(huì)使線粒體功能異常,引起骨骼肌細(xì)胞不可逆性損傷。目前的相關(guān)研究多限于研究動(dòng)物細(xì)胞胞漿內(nèi)的Ca2+濃度及MPTP的變化,對(duì)人體下肢缺血肌肉線粒體基質(zhì)內(nèi)Ca2+攝取和釋放能力及MPTP開(kāi)放程度的研究尚未見(jiàn)報(bào)導(dǎo)。本研究旨在明確動(dòng)脈硬化閉塞癥患者下肢缺血肌肉的形態(tài)學(xué)變化及線粒體功能的變化和意義,尋求治療下肢動(dòng)脈閉塞性疾病的新靶點(diǎn)。
　　 實(shí)驗(yàn)方法

3、>　　 選取2009年12月到2012年1月中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院血管甲狀腺外科因下肢動(dòng)脈硬化閉塞癥導(dǎo)致缺血而截肢的患者,以及骨科非血管病變下肢截肢患者的腓腸肌、比目魚(yú)肌、趾長(zhǎng)伸肌標(biāo)本各2處(大小約1cmx1cmx1cm),標(biāo)本共采集28例,(其中血管甲狀腺外科因下肢動(dòng)脈硬化閉塞癥而缺血截肢的肌肉標(biāo)本20例作為實(shí)驗(yàn)組,骨科非缺血肌肉標(biāo)本8例作為對(duì)照組),將肌肉標(biāo)本中1份用石蠟包埋后行HE染色,用于光鏡下觀察缺血肌肉的形態(tài)變化;其余部

4、分肌肉標(biāo)本用錫鉑紙包好放入Eppendorf管中保存于-80℃冰箱中備用,行線粒體游離Ca2+濃度測(cè)定及MPTP的開(kāi)放程度測(cè)定。缺血實(shí)驗(yàn)組再按照有無(wú)糖尿病分為糖尿病組與非糖尿病亞組,進(jìn)一步比較兩組線粒體Ca2+濃度及MPTP開(kāi)放程度。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　 實(shí)驗(yàn)組各肌肉細(xì)胞大小不等、形態(tài)不規(guī)則,而對(duì)照組各肌肉細(xì)胞均勻、飽滿,沒(méi)有萎縮的跡象。實(shí)驗(yàn)組中腓腸肌、比目魚(yú)肌、趾長(zhǎng)伸肌的線粒體Ca2+濃度及MPTP開(kāi)放程度均顯著高于