花生四烯酸細(xì)胞色素P450表氧化物酶基因?qū)Ω咧嬍痴T導(dǎo)小鼠動(dòng)脈粥樣硬化的保護(hù)作用和機(jī)制研究.pdf

1、研究背景和目的：動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis AS)所致的心血管疾病是嚴(yán)重危害人類生命健康的疾病之一。因此，研究動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制，并找到相應(yīng)的預(yù)防及治療方法，對(duì)冠心病防治有著非常重要的意義。越來越多的證據(jù)表明動(dòng)脈粥樣硬化是慢性炎癥性疾病，炎癥反應(yīng)伴隨著動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展直至其斑塊破裂的整個(gè)過程，眾多的細(xì)胞和化學(xué)因子參與其中，血管內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙被認(rèn)為是動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病的早期關(guān)鍵性環(huán)節(jié)?；ㄉ南┧?arachi

2、donic acid AA)是人體內(nèi)多種重要心血管活體物質(zhì)的前提，其代謝產(chǎn)物對(duì)心血管系統(tǒng)有顯著的保護(hù)作用，包括作為超級(jí)化因子舒張血管、上調(diào)一氧化氮合酶保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞、抗炎、抗凋亡和促進(jìn)血管生成等,這些對(duì)于改善動(dòng)脈粥樣硬化有重要的作用。那么花生四烯酸細(xì)胞色素P450表氧化物酶(cyptochrome P450 expoxygenase CYP450)代謝產(chǎn)物環(huán)氧化二十碳三烯甘油酸(Epoxyeicosatrienoic Acids EE

3、Ts)對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化是否有治療作用？本文旨在高脂飲食誘導(dǎo)小鼠動(dòng)脈粥樣硬化模型中研究CYP2C8基因?qū)?dòng)脈粥樣硬化的作用及相關(guān)機(jī)制。
　　 方法：雄性內(nèi)皮特異性CYP2C8轉(zhuǎn)基因小鼠(CYP2C8Tg+/-)與雌性C57BL/6小鼠雜交，獲得CYP2C8Tg+/-小鼠和C57BL/6小鼠；雄性內(nèi)皮特異性CYP2C8轉(zhuǎn)基因小鼠(CYP2C8Tg+/-)與雌性APOEKO-/-小鼠雜交，獲得APOEKO+/-CYP2C8Tg+/-小鼠

4、和APOEKO+/-小鼠，這四種小鼠按照Zeldin實(shí)驗(yàn)室提供鑒定方案鑒定小鼠基因型。將5周斷乳的雄性小鼠隨機(jī)分組，并開始高脂飲食喂養(yǎng)至20周和40周。各組小鼠于第5、15、20、30、40周內(nèi)眥靜脈采血，測(cè)非空腹總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白膽固醇濃度；在第5，20，40周時(shí)各組動(dòng)物留尿，用ELISA法檢測(cè)各組動(dòng)物EET含量；于第5、10、15、20、25、30、35、40周測(cè)各組體重。在20周和40周處死動(dòng)物留取主動(dòng)脈做oil r

5、ed O染色，觀察主動(dòng)脈斑塊形成情況。在20周和40周處死動(dòng)物用ELISA法檢測(cè)各組小鼠的血漿IL-1β和IL-10，用Real-time PCR法檢測(cè)各組小鼠的主動(dòng)脈PPAR-γ、MCP-1、TNF-α、IL-6、MMP-9基因表達(dá)水平，Western blot分析各組小鼠的主動(dòng)脈(p-)eNOs、NF-κB和MMP-9蛋白的表達(dá)與小鼠的肝臟PI3K、(p-)AKT、(p-)ERK和(p-)P38等信號(hào)通路蛋白的表達(dá)情況。
　　

6、 結(jié)果：與正常飲食組比較，高脂飲食在20周成功誘導(dǎo)成動(dòng)脈粥樣硬化。在高脂飲食中，CYP2C8Tg+/-組和APOEKO+/-CYP2C8Tg+/-組的TG和 TCH濃度分別明顯低于C57BL/6組(P<0.05)和APOEKO+/-組(P<0.05)，CYP2C8Tg+/-組和APOEKO+/-CYP2C8Tg+/-組的HDL濃度分別明顯高于C57BL/6組(P<0.05)和APOEKO+/-組(P<0.05)。在高脂飲食中，CYP2

7、C8Tg+/-組和APOEKO+/-CYP2C8Tg+/-組的主動(dòng)脈斑塊形成的指標(biāo)分別明顯低于C57BL/6組(P<0.01)和APOEKO+/-組(P<0.01)；40周APOEKO+/-組的主動(dòng)脈斑塊形成的指標(biāo)明顯高于20周 APOEKO+/-組(P<0.05)。在高脂飲食中，CYP2C8Tg+/-組和APOEKO+/-CYP2C8Tg+/-組的EET濃度分別明顯高于C57BL/6組(P<0.01)和APOEKO+/-組(P<0.0

8、5)；各組的40周EET濃度分別明顯高于20周(P<0.05)。Western blot分析結(jié)果顯示：高表達(dá)CYP2C8在肝臟中明顯上調(diào)PI3K、(p-)AKT、(p-)ERK和(p-)P38蛋白的表達(dá)；在主動(dòng)脈明顯上調(diào)(p-)eNOs蛋白的表達(dá)，下調(diào)NF-κB和MMP-9蛋白的表達(dá)。Real-time PCR分析顯示高表達(dá)CYP2C8在主動(dòng)脈中明顯上調(diào)PPAR-γ蛋白的表達(dá)，下調(diào)MCP-1、TNF-α、IL-6和MMP-9蛋白的表達(dá)。

9、在血清學(xué)上，高表達(dá)CYP2C8明顯上調(diào)IL-10而下調(diào)IL-1β。
　　 結(jié)論：本研究發(fā)現(xiàn)在高脂飲食的小鼠中隨著年齡增長(zhǎng)，EETs上調(diào)可能是機(jī)體一種代償行為和自我保護(hù)機(jī)制。高表達(dá)CYP2C8基因具有顯著的抗炎作用，這一作用是與激活了PI3K、(p-)AKT、(p-)ERK、(p-)P38和(p-)eNOs蛋白有關(guān)，還與在主動(dòng)脈中抑制了MCP-1、TNF-α、IL-6和 MMP-9基因有關(guān)。高表達(dá)CYP2C8基因能夠改善血脂和斑塊